草菇(Volvariella volvacea)是我国主要的栽培食用菌品种之一,原产自我国东南地区,是一种生长在高温高湿地区的草腐性食用真菌,其味道鲜美、营养价值高,具有重要的商业价值。草菇属于高温真菌,人工栽培耗能高,另外草菇的生物转化率低(仅20%左右),这些严重阻碍了草菇产业规模的发展。本研究主要目的是利用单孢杂交选育草菇耐低温高产新菌株。首选进行了出菇试验,从17株出发菌株中筛选得到高产草菇菌株,与耐低温型菌株VH3共同作为杂交亲本;同时利用RAPD技术对出发菌株的遗传多样性进行了分析。其次以草菇菌株VH3及其单孢菌株为材料,利用RAPD技术分析了单孢菌株和其亲本菌株的差异;并且利用交配型基因标记区分了出发菌株以及草菇单孢子的交配型。最后结合快速筛选耐低温草菇菌种技术和交配型基因分子标记鉴定草菇杂交子的方法完成了草菇杂交育种,最后获得了一株耐低温高产的草菇新菌株VV093。本研究的主要结果如下:1.供试菌株品比试验分别统计了菌丝生长速度、原基出现时间、大量采收日期、子实体横竖直径及菌膜厚度、生物转化率等农艺性状。主要以生物转化率为标准,产量最高的菌株分别是屏优1号、0229、Vn-1和Z-V23,其生物转化率分别为21.73%、18.58%、16.36%和15.99%。同时综合考虑其他农艺性状,0229的菌膜厚度最薄,最易开伞,不宜作为杂交亲本。所以初步选择屏优1号、Vn-1以及Z-V23这三个高产菌株作为杂交高产亲本。2.供试菌株遗传多样性分析主要是基于RAPD技术进行的。35条随机引物中,有9条引物扩增条带清晰稳定、可重复性好,这9条引物被用于接下来的RAPD分析。分析结果表明供试草菇菌株遗传相似系数0.68到1.00之间。当遗传相似系数为0.784时,供试菌株可以被分为四组。基于交配型基因的多态性分析表明,试草菇菌株的交配型类型主要有三种,分别是A1A2、A3A4、A5A6。屏优1号的交配型为A1A2,泰国NO.1、Vn-1和Vn-3交配型为A5A6,其他菌株为A3A4。结合供试菌株品比试验结果,最终选择屏优1号、Vn-1为高产亲本。3.从菌落形态、菌丝生长速度和RAPD方法研究了草菇菌株VH3和它的14个单孢菌株的生长发育和遗传变异。研究表明,草菇菌株VH3和它的单孢菌株在菌落形态、菌丝生长速度方面存在明显差异。供试菌株的菌落形态有气生型和匍匐型两种,菌丝长势也各不相同;单孢菌株的菌丝生长速度和亲本菌株VH3也不相同,单孢菌株中V4和V10的菌丝生长速度最快。同时RAPD指纹分析表明在基因水平,草菇菌株VH3和它的单孢菌株存在一定的遗传差异。从35条随机引物中筛选出9条扩增条带多态性较好、稳定性较强的引物进行RAPD分析,得到的遗传相似系数聚类图表明亲本菌株和单孢菌株的平均遗传相似系数在0.50左右,供试菌株遗传差异较大。草菇VH3菌株和单孢后代的表型和基因型差异表明VH3菌株通过有性生殖产生了丰富的生物学变异。4.利用交配型标记区分亲本单孢菌株的交配型,进行单孢杂交,利用快速筛选耐低温草菇菌株技术与交配型标记鉴定杂交子技术而获得耐低温的草菇杂交子。出菇试验表明,利用交配型标记辅助杂交的方法可以高效地筛选出真实杂交子;并且该标记的使用也有助于杂交子的结实(结实率高);在28℃出菇温度下,杂交菌株VV093的生物转化率相较于亲本菌株有了显著的提高,并且综合农艺性状较优良。因此,利用交配型标记辅助单孢杂交的方法可以高效地选育出耐低温高产草菇新菌株。5.对出菇试验所统计的农艺性状进行了相关性分析,可以得出:原基出现时间和采收时间呈显著的正相关关系,即原基出现时间越短,采收时间也就越短;原基出现时间可能与草菇大小(横竖直径)呈负相关关系,也就是原基出现时间越短,草菇个头可能更大;原基出现时间以及采收时间均和生物转化率呈显著的负相关关系;草菇大小(横竖直径)可能也与生物转化率存在一定的相关性,往往草菇个头越大的的草菇菌株具有更高的生物转化率。