目 的:老化是当今科研关注的重点问题,而光老化是多个复杂机制共同作用的结果。EGCG(Epigallocatechingallate)是绿茶多酚中最主要的活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯,EGCG对多种细胞都有抗氧化的作用。EGCG可能通过激活细胞中的抗氧化分子以及调控某些相关基因的表达,对细胞起到光保护作用。在我们的前期研究中,我们已经发现,黄芩苷能够抑制氧化信号的相关通路,保护细胞免受老化的损伤。其中,活性氧(ROS)的通路激活是导致细胞老化的关键步骤。本研究拟探讨EGCG对UVA诱导的人皮肤成纤维细胞光老化的影响及分子机制,为EGCG应用于皮肤老化的治疗提供理论支持。方法:1、应用CCK-8法检测细胞增殖活性来建立合适的光老化模型和选择合适的EGCG的药物浓度。2、应用β-半乳糖苷酶试剂盒检测老化成纤维细胞的数量和形态。3、应用实时定量PCR测定端粒的长度,使用端粒重复序列扩增法以及酶联免疫吸附法检测端粒酶的表达情况。4、应用ELISA试剂盒检测SOD,MDA,GSH-Px和CAT活性。5、应用流式细胞仪检测老化成纤维细胞的细胞周期。6、应用实时定量 PCR 分别检测MMP-1,TIMP-1,p66Shc,p53,p16 和 c-myc mRNA水平的表达。7、应用ELISA试剂盒检测成纤维细胞的TGF-β 1水平的表达。结 果:1、CCK-8检测法显示,我们选用10J/cm2作为建立成纤维细胞光老化模型的合适剂量,选用EGCG浓度25ug/ml作为后续实验浓度。2、UVA组可以观察到,β-半乳糖苷酶染色后的细胞中,阳性细胞呈现显著升高的趋势。在UVA+EGCG组中阳性细胞显著低于UVA组,且对照组和EGCG组中可观察到的阳性细胞更少。3、实时定量PCR实验表明,EGCG可以延长成纤维细胞端粒的长度,但不能延长UVA诱导的老化成纤维细胞端粒的长度。UVA辐照在一定程度上可以影响端粒酶活性,而EGCG对成纤维细胞端粒酶的活性无明显影响。4、ELISA实验表明,EGCG使老化的成纤维细胞中SOD、GSH-Px和CAT的含量有显著的提升,而抑制MDA的生成,意味着EGCG能够提高UVA诱导的老化成纤维细胞抗氧化能力,并且抑制相关的氧化损伤。5、流式细胞术检测细胞周期,提示EGCG对UVA诱导的老化成纤维细胞周期G1期的阻滞有一定的延缓。6、实时定量PCR结果显示,EGCG使得UVA诱导的老化细胞中MMP-1、p66shc、c-myc的mRNA水平的表达明显降低,MMP-1、p66shc、c-myc作为氧化损伤相关的分子,意味着EGCG能够通过抑制相关的氧化损伤,降低UVA对成纤维细胞的损伤。7、ELISA实验证明,EGCG能够增强UVA诱导的老化成纤维细胞中TGF-β1的表达,TGF-β1的活性增强能够延缓成纤维细胞的老化。结论:本实验表明EGCG通过提高SOD、GSH-Px和CAT在老化成纤维细胞的表达,抑制MDA的表达,从而提高老化细胞的抗氧化能力,同时EGCG能够抑制MMP-1、p66shc、c-myc的表达,进一步抑制相关的氧化损伤通路,EGCG还通过增强老化成纤维细胞中TGF-β1的表达,延缓细胞衰老。为EGCG在光老化皮肤以及皮肤癌变的相关治疗的应用提供有力的实验证据。