经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）是目前治疗冠心病最有效的非手术有效治疗方法；但术后高达30—50％的再狭窄发生率严重的影响了其应用。因此，再狭窄是近年心血管内科的研究热点。对于其发生机制以往多注重对平滑肌细胞增殖异常的研究，最近的研究表明凋亡不足是再狭窄形成机制之一，促进平滑肌细胞凋亡己成为防治再狭窄的一种新的策略。 细胞凋亡是一个主动的、可调控的死亡形式，受一系列基因调控。基因治疗通过作用凋亡调控基因对细胞凋亡发生影响。核酶（Ribozyme）是一种具有催化活性的RNA分子，它可以序列特异地切割RNA分子。核酶具有底物高度特异性、催化活性中心核苷酸序列极为保守、能反复利用的特点，在阻断有害基因表达方面比反义核酸更为有效。目前研究最多的凋亡调控基因为Bcl-2，它是一种凋亡抑制基因，可以抑制多种因素诱导的凋亡。针对该基因，采用核酶技术诱导平滑肌细胞凋亡还未见报道。 本研究旨在探讨Bcl-2的表达与再狭窄的关系，明确切割人Bc1-2核酶对VSMC凋亡的影响。为寻找再狭窄的新的基因治疗途径提供实验材料和依据。本研究的实验方法和结果主要有： 一 1．首先采用免疫组化方法（ABC法）对置入支架后的猪冠状动脉 进行检测，结果显示 14支支架置入的冠状动脉标本中 77．5oBCI—2表达 呈阳性，明显高干正常冠状动脉标本 25％的阳性率。 2．以含有MT刁启动子的真核表达载体pMTHSp70呗CO为基础，利 用质粒 pMTHSP70－neo分别含有 EcoR、BamI和 Hind位点，将 将 pGsMR一sZf（一）一RZ中的切割人 Bcl毛 核酶基因替换 pMTHsp700eo中的HsP70基因。构建成可诱导型切割人BCI一二核酶真 核表达载体pMT卜m山重组后的载体进行酶切鉴定，证实载体构建正确。 3．建立国人脐动脉血管平滑肌细胞（VSMCS）培养方法，成功培养 了人体血管平滑肌细胞（HVSMCS）。 4．采用脂质体介导的DNA转染法，将含有切割BC12theA核酶基 因的可诱导型真核细胞表达载体 pMTr呗eo成功的转染入人血管平滑肌 细胞。用 DNA和 NA打点杂交以及原位杂交检测均观察到 RZ基因己 转入 VSMC，并在其内表达。免疫组化法检测转染后 HVSMCS内 BC12 蛋白水平，结果显示pMTf呗印转染细胞BC12蛋白表达水平较对照组明 显降低。 5．T皿L检测 pMTR—neo转染细胞出现阳性反应，阳性率 15·4o。 6．透视电镜显示pMTrmeo转染细胞出现染色质浓缩、边集、膜包 绕的核碎片等典型的细胞凋亡现象。 7．流式细胞仪检测细胞周期发现转染后 HVSMC出现明显的凋亡峰。 以上研究结果表明：IB＊ 高表达可能和冠脉支架术后平滑肌凋亡 抑制有关。2．BCI上 核酶对培养的人血管平滑肌细胞BC12蛋白表 达具有下降作用，并对血管平滑肌细胞凋亡具有明显促进作用。为探讨 B＊上 核酶作为再狭窄的新的治疗途径提供了实验依据和材料。