白附子(Rhizoma Typhonii)为天南星科犁头尖属独角莲(Typhonium giganteum Engl.)的干燥块茎,具有祛风痰,定惊搐,解毒散结,止痛的功效,主要用于中风痰壅,口眼喁斜,语言謇涩,惊风癫痫,破伤风,疫厥头痛,偏正头痛,瘰疬痰核,毒蛇咬伤的治疗。现代药理学研究表明:白附子乙醇提取物具有显著的保护缺血性脑损伤的作用,但具体活性成分不明。本论文旨在研究白附子的化学成分及其神经保护活性,并初步阐明白附子的化学成分与功效之间的关系,为白附子有效成分的发掘及新药研发奠定基础。主要工作概括如下:第一章白附子化学成分的系统分离研究。本实验首先将白附子70%乙醇提取物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三个萃取部位。紧接着我们重点针对乙酸乙酯和正丁醇萃取部位进行系统的分离,主要综合运用硅胶、ODS、MCI、Sephadex LH-20柱色谱和HPLC等手段,共分离得到了 60个化合物,通过各种波谱分析(MS、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR等),并结合理化常数测定,鉴定了其中44个化合物(13个脑苷脂类化合物,8个脂类化合物,4个甾体类化合物,18个含氮杂环类化合物,1个氨基酸),其中2个(化合物16和17)为新化合物,分别命名为白附子脑苷E(typhoniside E)和白附子脑苷F(typhoniside F);4个(化合物24,25,43和44)为首次从天南星科植物中分离得到,分别为 3-O-β-D-glucosyl-stigmasta-5,24(28)-diene,1-linoleoyl-2-palmitoyl-3-O-[α-D-galactopyranosyl-(6-1)-O-β-D-galactopyranosyl]gly cerol,coptisine和berberine;3个(化合物20,21和30)为首次从犁头尖属中分离得到,分别为 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3R，4E,8E)-2-[2’(R)-hydroxytetracosanoyl-amino]-4,8-octadecadiene-1,3-diol,1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3R,4E,8Z)-2-[2’(R)-hydroxytetracosanoyl-amino]-4,8-octadecadiene-1,3-diol和2’-脱氧尿苷;6个(化合物1,4,5,7,8,27,28和36)为首次从独角莲中分离得到,分别为亚油酸,亚油酸-1-甘油酯,1-亚油酸-3-棕榈酸-甘油酯,邻苯二甲酸二丁酯,邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯,鸟嘌呤核苷,2’-脱氧胸苷和2-氨基嘌呤。并通过拉曼光谱结合TLC和MS推测微量成分化合物45可能为巴马汀。第二章白附子中脑苷脂类化合物的体外神经保护活性研究。本研究首先建立谷氨酸损伤PC12细胞模型,并通过MTT法检测细胞活力,确定谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L;然后重点考察白附子中脑苷脂类化合物10-22对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用。实验结果表明:脑苷脂类化合物10-22对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞均有保护作用。通过构效关系分析,我们发现脂肪酰链较长的脑苷脂类化合物20和21对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞的保护作用最强。第三章化合物20对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用的分子机制研究。首先我们通过细胞形态学观察及细胞活力检测,考察不同浓度的化合物20对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用的影响,在此基础上,通过Annexin V-FITC/PI双染考察其对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡率的影响,最后采用Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3家族相关蛋白表达指标来探讨化合物20对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用的分子机制。MTT实验结果表明:在一定浓度范围内(0.1～10μM),随着化合物20的给药浓度增大,细胞存活率明显提高,表现出显著的浓度依赖性;Annexin V-FITC/PI双染实验表明:脑苷脂化合物20在一定程度上能够降低谷氨酸诱导的PC12细胞的凋亡率;Western blot实验结果显示:化合物20能够通过抑制谷氨酸诱导的Caspase-3蛋白表达上调,以及降低Bax和Bcl-2蛋白比例,从而减少细胞损伤和凋亡的发生,发挥其对损伤细胞的保护作用。