生防细菌菌株GXG-2-2的筛选、鉴定及其产生的抑菌活性物质的初步研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xxxhot006
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本试验旨在从不同的枯草样品中分离筛选出对小麦全蚀病和几种常见的植物病原真菌都具有较好颉颃作用的生防芽孢杆菌,并对颉颃效果较好的生防菌株进行鉴定和发酵条件优化;对其产生的抑菌活性物质进行初步的研究。(1)本试验首次从采自陕西杨凌的5份枯草样品中分离得到了253株细菌,通过平板对峙法、单胞分离和液体发酵试验、盆栽复筛试验得到了一株对小麦全蚀病菌具有强烈颉颃作用的新菌株GXG-2-2。(2)对GXG-2-2菌株发酵条件进行了优化,确定该菌株的最佳培养时间是48h,最适生长温度28℃,且培养基初始pH为7.0,装液量100 mL,摇瓶转速为180 r/min时,细菌菌量、蛋白量和抑菌效果都达到最佳。(3)室内盆栽测定发现,枯草芽孢杆菌GXG-2-2对小麦全蚀病都有明显的抑制作用,而且对根长、株高、根干重、鲜重、地上部干重和鲜重都有明显的增加。枯草芽孢杆菌GXG-2-2菌悬液用土壤浇灌法施用防治小麦全蚀病比种子包衣、浸种防治效果明显,在播种同时施用比24h以后和播种7d后效果好,高浓度比低浓度防治效果明显。(4)通过皿内生物颉颃活性测定,研究了GXG-2-2菌株的抗菌蛋白粗提液的抑菌谱。结果表明,GXG-2-2菌株具有较广的抑菌谱,对20种病原真菌和3种供试细菌有较好的抑制效果。其中对小麦纹枯病菌和大白菜软腐病菌抑制能力最强。(5)按照传统鉴定方法,根据菌株GXG-2-2的培养性状、形态特征、染色反应及一些生理生化反应的试验结果,并参照相关文献,初步判定其为芽孢杆菌属的枯草芽孢(Bacillus subtilis)。(6)粗蛋白性质研究结果发现:当达到80%饱和度的(NH4)2SO4沉淀时,抗菌蛋白的量达到最大值,抑菌活性也达到最大。粗蛋白在中性和碱性条件下都有活性,pH为7.6时,活性最高。粗蛋白对温度、紫外线和蛋白酶K不敏感,对氯仿部分敏感。用PAGE已经检测到了具有活性的蛋白条带。
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