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研究背景:痴呆是严重危害老年人健康的一种获得性进行性认知功能障碍综合症,其中,Alzheimer病(Alzheimer’s Disease, AD)一直占据痴呆发病率的首位,是老年人的常见病之一。但是,散发性AD(sporadic Alzheimer disease,SAD)至今病因不明。近年来,大量研究表明,脑缺血,尤其是老年人普遍存在的脑慢性低灌注与散发性AD强烈相关,可以导致AD发病过程中的核心物质β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)增加,但是具体机制仍不清楚。α-分泌酶(TACE)、β-分泌酶(BACE1)分别是淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)进行淀粉样和非淀粉样代谢的关键酶,也是调节Aβ生成量的关键物质,因此在脑慢性低灌注条件下对TACE,BACE1进行研究对于明确Aβ增加的机制以及进一步探讨AD的病因都有重要的意义。标准化银杏叶制剂(Ginkgo Biloba extract,Egb761)目前常用于AD的治疗,其具有的多种药理作用均被认为有益于改善AD症状,延缓病程,但是否能影响Aβ尚不明确。目的:1.探讨脑慢性低灌注对老龄大鼠海马α、β-分泌酶mRNA表达及酶活性的影响;2.通过研究Egb761(商品名:金纳多)对脑慢性低灌注老龄鼠α、β-分泌酶及学习记忆功能的影响探讨其是否可以通过影响α、β-分泌酶调节Aβ的生成量从而改善AD的症状。方法:老龄Wistar大鼠随机分为假手术组、低灌注组和Egb761治疗组,各组再进一步分为1周、2周、4周和16周亚组。低灌注组和Egb761组行双侧颈总动脉永久结扎(two vesseles occlusion,2VO)术,假手术组仅分离血管不结扎,Egb761组术后即以金纳多100mg/(kg*d)灌胃,7天亚组疗程1周,其他亚组疗程2周。各亚组在术前及处死前分别进行Y-迷宫试验,检测大鼠学习记忆能力。在各时间点处死后,迅速断头取脑,分离双侧海马,提取蛋白或RNA后,-80℃保存备用。应用Real-time PCR和荧光法(底物特异性荧光探针)分别检测α、β-分泌酶mRNA和酶活性的变化。结果:1.脑慢性低灌注对老龄大鼠海马α、β-分泌酶mRNA表达的影响及金纳多对其的影响:低灌注组TACE mRNA在2VO术后1周时与对照组无显著性差异(p>0.05),2、4、16周时明显低于对照组(p<0.01)。金纳多在用药期间显著升高TACE mRNA的表达,停药后,在第4周,其TACE mRNA表达仍显著高于低灌注组(p<0.01)。脑慢性低灌注导致海马BACE1 mRNA的表达在术后1周时即有所降低(p<0.05 vs假手术组),2周时降低更明显(p<0.01 vs假手术组),4周和16周时恢复到与假手术组无显著性差异(p>0.05);金纳多在各时间点对BACE1 mRNA的表达均无影响(p>0.05)。2.脑慢性低灌注对老龄大鼠海马α、β-分泌酶活性的影响及金纳多对其的影响:与假手术组相比低灌注组2VO术后各时间点TACE活性均显著降低(p<0.01),BACE1活性均显著上调(p<0.01或p<0.05)。金纳多在用药期间可以显著升高TACE的活性并降低BACE1活性(p<0.01或p<0.05)。3.脑慢性低灌注对老龄大鼠学习记忆能力影响及金纳多对其的影响:2VO模型鼠在2周时即出现明显的认知功能下降(p<0.05 vs假手术组)4周和16周时认知功能的损害更为明显(p<0.01 vs假手术组),未出现恢复的趋势。Egb761组在术后4周和16周学习记忆能力较低灌注组有显著改善(p<0.05)结论:1.脑慢性低灌注可以影响α、β-分泌酶的活性和mRNA表达。2.金纳多对AD症状的改善可能与其对α、β-分泌酶的活性和表达的影响而进一步导致Aβ生成减少有关。