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色谱分离技术是目前最具优势的提纯生物体系的方法,开发新型的色谱分离材料成为生物分离领域的一个热点。本文致力于开发多种生物分离材料,研究其合成的影响因素,应用于抗体及多肽的提纯中并考察其色谱性能。 在第二章,通过环氧活化、己二胺接枝、戊二醛偶联反应将蛋白A键合到琼脂糖基质上,得到一系列键合有蛋白A的抗体分离材料(A-SPA-SE)。通过改变琼脂糖的环氧活化密度、间隔臂长度、配体的偶联方式、配体的初始浓度,考察了材料分离性能的影响因素。结果表明:琼脂糖的表面环氧基团密度存在最佳值,即33μmol/g-wet gel,蛋白A的键合量也存在较优的值23μ mol/mL-gel,此时材料的分离性能较优;应用该抗体分离材料(命名为SE-4523)于不同种类的抗体提纯中,结果证明对正常人、兔血清、免疫兔血清及小鼠腹水中抗体有良好的选择性,其中兔血清中抗体提纯量达到35mg/mL-gel,人血清提纯量达到30mg/mL-gel;与GE商品柱进行对比, SE-4523的兔抗体提纯量可以高出GE商品柱的一倍;与硅胶基质的蛋白A柱进行对比,SE-4523的高键合量使之有硅胶柱1.5倍的抗体吸附量,并且循环使用,吸附性能稳定。 第三章,制备一系列键合聚天冬氨酸的固定相材料YCSiP,研究其对6种多肽的分离性能,探讨硅胶孔径、聚琥珀酰亚胺的分子量和流动相条件(如pH值、离子强度)等对多肽分离的影响。结果表明,聚天冬氨酸的固定相对多肽的分离主要受静电作用影响;由小孔径的硅胶和低分子量的聚琥珀酰亚胺得到的固定相YCSiP-Ⅰ对这些多肽表现更好的分离性能;同时,随着流动相离子强度增大,6种多肽在柱上的保留显著减弱,在离子强度为50 mM时6种多肽在YCSiP-Ⅰ固定相上得到最佳的分离。此外,应用YCSiP-Ⅰ于血清中抗体及水解蛋白肽的分析,结果表明,聚天冬氨酸的固定相具有一定的抗体分离提纯能力,在复杂多肽组分的分析方面也展现了一定的应用前景。