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鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是主要感染雏鸭等多种禽类的一种革兰氏阴性病原菌。鸭疫里默氏杆菌具有多种血清型及对多种抗生素药物具有天然抵抗作用,目前对于鸭疫里默氏杆菌耐药及致病机制知之甚少。本研究对RA ATCC11845株lptD基因在耐药及致病中的功能进行研究,主要结果如下:1.不同RA分离株lptD基因的戊二醛耐受性为探讨lptD基因表达量与不同RA分离株耐受有机溶剂的关系,本研究首先对RA CH-1株与RA ATCC 11845株对有机溶剂戊二醛的耐受性进行了检测,结果表明:戊二醛对RA CH-1株和RA ATCC 11845株的MIC值分别为0.1%和0.05%;进一步通过荧光定量PCR检测表明,RA CH-1株lptD基因转录水平比RA ATCC 11845株高约为2倍;分别使用0.01%和0.005%浓度戊二醛处理RA CH-1株和RA ATCC 11845株,lptD基因转录水平分别约上调3和10倍。综上表明,lptD基因的表达与鸭疫里默氏杆菌对戊二醛的耐受性存在正相关性。2.RA ATCC 11845株lptD基因低表达株及其回补菌株的构建本试验将lptD基因起始位点的上下游约800 bp同源臂及红霉素抗性片段用PCR扩增并融合,融合后的片段以自然转化的方法导入RA ATCC 11845野生株中,使带有启动子的红霉素抗性片段插到lptD基因起始位点前端,让lptD利用抗性的启动子转录,达到基因低表达的目的;将带有启动子的lptD序列克隆到pLMF03上,采用接合转移的方法,将重组质粒导入低表达株,构建回补株。经PCR、定量PCR鉴定,lptD低表达株RA ATCC 11845 lptD~-和低表达回补株RA ATCC 11845 lptD~-::lptD构建成功。3.RA ATCC 11845株lptD基因的生物学功能鉴定(1)生长曲线结果表明,与野生株相比,lptD基因的低表达株生长速度明显降低(2)经感应浓度的戊二醛处理后,与野生株相比,RA ATCC 11845 lptD~-株的存活率降低2倍;(3)与野生株相比,lptD低表达株对阴离子表面活性剂SDS表现出高敏性。具体表现为,lptD低表达株在高于0.02%的浓度就已经失活,野生株在0.08%的浓度下仍有活性;(4)lptD低表达株的被膜生成率为野生株的1/2;(5)与野生株相比,lptD低表达株对非灭活血清的耐受性明显减弱。4.RA ATCC 11845株lptD基因参与其在宿主体内的定殖分别用10~9CFU的野生株菌液和低表达菌液感染雏鸭,感染12 h和18 h后,野生株在肝脏、脑、脾等器官以及心血中的定殖数量明显高于低表达株(p<0.05)。说明RA ATCC 11845 lptD基因低表达株在雏鸭体内的定殖能力降低。综上,lptD基因参与了RA ATCC11845对戊二醛耐受和疏水性药物耐受、影响膜通透性、被膜生成率、非灭活血清耐受等生物学功能,且该基因影响RA ATCC11845在宿主体内的定殖。