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目的:
本实验以体外培养的方法，将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞(TD-BMNC)，以青蒿鳖甲汤含药血清与细胞因子联合培养，观察含药血清对此来源的树突状细胞（DC）分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞（DC）与纯化的正常人和缓解期患者外周血T细胞共同培养，观察对T细胞增殖能力的影响。用激发的T细胞与白血病细胞株(K562)共同培育，以MTT法测定该T细胞对K562细胞株的杀伤活性，探讨扶正透毒祛毒方药对急性髓细胞白血病患者DC的免疫功能的影响。
方法:
从正常人外周血及急性髓细胞白血病患者完全缓解后外周血分离纯化得到T细胞，应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从ANLL-CR患者骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞（TD-MNC），制备中药含药血清，用含10％FCS的RPMI1640培养液调整TD- BMNC细胞浓度后加入6孔板中培养，培养9～12d，每3～4d换液1次，以不同浓度中药含药血清与细胞因子（GM-CSF、IL-4、TNF-α）联合培养，在培养过程中动态观察细胞生长，七天后流式细胞仪检测DC表面免疫分子CD86、CD1a、HLA-DR的表达，分别收集纯化的同种异体T细胞、AML-CR患者自体T细胞，与AML-CR患者TD-MNC来源的DC以10：1比例加入24孔培养板培养5d，培养基中加入100U/ml的IL-2进行同种异体T细胞及自体T细胞的激发，激发后的各组T细胞与K562细胞分别以10：1、20：1、40：1效：靶比例培养24h，MTT法检测不同条件培养的DC诱导T细胞的杀伤效应。
结果：
新鲜分离的的ANLL－CR患者去T细胞的骨髓MNC（TD-BMNC），经2h的贴壁，去除悬浮的淋巴细胞分离后，剩下的贴壁细胞加入不同中药含药血清和细胞因子组合的培养基中诱导培养，倒置显微镜下观察,培养前3天大部分细胞呈贴壁生长，体积小、圆形、细胞边界光滑；4－6天悬浮细胞数量增多，体积增大，可见毛刺样突起，含药血清联合细胞因子组尤为明显，诱导培养9天后细胞出现明显的树突状突起，细胞形态不规则，胞质丰富，并有成簇现象，细胞具有DC的典型形态学特征。ANLL－CR患者去T细胞的骨髓MNC（TD-BMNC）均能分化为形态特征典型的DC，能表达成熟DC的特异性标记（CD-86和CD-1a），高表达HLA-DR。
结论：
联合运用GM-CSF、IL-4、TNF-α和青蒿鳖甲汤含药血清，可从来源于AML-CR患者的TD-BMNC诱导培养出DC，该来源的DC能诱导自体和健康自愿者的T淋巴细胞，诱导特异性的抗肿瘤免疫作用。DC诱导的抗肿瘤免疫与其浓度和青蒿鳖甲汤含药血清浓度有关。含药血清可能具有细胞因子的作用，能促进DC的诱导活化,增强DC的生物学活性。其机理可能是含药血清联合细胞因子诱导DC的过程中对 DC分化成熟过程及其功能产生有利的影响，其表型和功能的异常得到修复而趋于正常，DC再通过增强细胞表面协同刺激分子CD80和 CD86与 T细胞表面CD28相互作用，从而增强对T细胞的刺激作用。