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目的:在获得含目的基因gtfB-ctxB的转基因生菜T2代种子的基础上，经大田栽培获得T3、T4代转gtfB-ctxB基因生菜植株。应用GUS染色技术、PCR技术对不同生长时期（幼苗期、开花期、种子成熟期）和不同部位（叶片、花、茎、种子）的转基因生菜后代植株进行跟踪检测，鉴定和筛选出两种转gtfB-ctxB基因生菜植株，记录gus活性检测阳性和（或）PCR检测阳性植株的分布情况，分别统计T3、T4代PCR阳性率，对报告基因gus和目的基因gtfB-ctxB表达的协同性进行研究，并初步分析目的基因gtfB-ctxB在转基因生菜后代植株中的遗传稳定性和生态安全性。
方法:本研究包括三个部分:
第一部分:防龋用转基因生菜后代植株中外源目的基因稳定性检测
提取转基因生菜T3、T4代植株三个生长时期（幼苗期、开花期、种子成熟期）、不同部位（叶片、花、茎、种子）基因组DNA。利用PCR技术鉴定并筛选出含外源目的基因gtfB-ctxB的转基因生菜植株。T3、T4代分别种植64株、25株。
第二部分:防龋用转基因生菜植株中报告基因gus和目的基因表达的协同性
1、采集T3、T4代A区转基因生菜和非转基因生菜植株幼根及幼叶，通过组织化学染色定位法检测转gtfB-ctxB基因生菜（含gus）植株中的gus基因，鉴定和标记出含报告基因gus的生菜植株，并记录GUS活性检测为阳性植株的分布情况。
2、采集T3、T4代A区转基因生菜植株的新鲜叶片，提取叶片总DNA进行PCR扩增，筛选含外源目的基因gtfB-ctxB的转基因生菜植株。
第三部分:转基因生菜的生态安全性检测
实验一、外源基因随花粉漂移的检测
试验田中，在中央留出1m×1m(1m2)的方形空地，种植转基因生菜作为花粉供体。在转基因生菜的外围种植对照组非转基因生菜为花粉受体。在种子成熟期，按距中心植株的不同方向、距离转基因生菜植株边缘不同距离收集T4代非转基因生菜种子实验室培养，采用PCR技术对非转基因生菜子代植株进行外源基因检测，统计并分析不同方向、不同距离转基因生菜中外源基因向非转基因生菜漂移的频率。
实验二、转基因植株根际土壤的检测
选取5株PCR检测为阳性的转基因生菜植株，分别在它们根部的东、南、西、北方向各取一份土壤样本，提取土壤总DNA进行目的基因根系漂移的检测。
结果:
1、T3代转基因生菜阳性植株共40株（A区19株，B区21株），T4代转基因生菜阳性植株共15株（A区6株，B区9株）。T3、T4代PCR阳性率分别为62.5％、60％。不同时期（幼苗期、开花期、种子成熟期）、不同部位（叶片、花、茎、种子）的检测结果一致。
2、T3、T4代A区分别有19株、5株为gus活性检测阳性。
3、①距离转基因生菜的不同方向、不同距离的非转基因生菜子代检测发现含有外源目的基因gtfB-ctxB;
②分别对5株含gtfB-ctxB转基因生菜的东、南、西、北四个方向根际土壤总DNA中未扩增出相应的目的片段;
结论:
1、获得了含外源基因gtfB-ctxB的转基因生菜植株，并且外源基因能够在转基因生菜后代植株中稳定遗传。
2、gus基因和目的基因gtfB-ctxB在转基因生菜植株中的表达具有一定的协同性，但二者在转基因生菜中的表达存在一定的差异。将GUS活性检测和PCR检测相结合进行转基因后代植株的筛选，以提高转基因后代植株筛选的速率和效率。
3、①转基因生菜中外源基因可以通过花粉漂移至周边的非转基因生菜植株中，且基因漂移频率随着距离的增加而呈明显递减趋势，在距中心0.5m时基因漂移频率最大，距中心4m处最小。气候因素中影响基因漂移频率高低的主要因素是风，顺风方向漂移频率是逆风方向漂移频率的约2.25倍。
②外源基因gtfB-ctxB未通过根系分泌物漂移至转基因生菜根系土壤中。