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肝纤维化是大多数慢性肝病向肝硬化发展的共同病理过程,是对慢性肝损伤的愈合反应,为一个可逆的过程。目前,我国各种肝病发病率呈上升趋势,它们都伴随着肝纤维化( hepatic fibrosis ,HF) ,最终发展成肝硬化,甚至引起肝功能衰竭,导致死亡,是一类世界性的严重危害人们健康的主要疾病。且长期以来,临床上也没有疗效确切的药物能够阻止其发生和发展。因而,肝纤维化也越来越受到肝病研究者的重视。肝纤维化(Hepatic fibrosis)是指肝脏纤维结缔组织的过度沉积,是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和降解不平衡的结果,是各种慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理改变和必经途径。肝纤维化的形成是由于各种损肝因子引起肝细胞损伤、坏死、凋亡及肝组织炎症反应,激活枯否细胞分泌多种细胞因子,共同作用于肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC),使HSC活化,以α-SMA及ECM生成增多为最显著的活化特征。转化生长因子( Transforming growth factor-beta,TGF-β)启动了肝星状细胞的活化,具有活化HSC,促进肝脏胶原基因表达,TGF-β1主要依赖其下游的受体和高度保守的胞内信号Smad蛋白家族介导其信号传递,发挥生物学效应。CTGF是新近发现的一种生长因子,是TGF-β1的下游效应介质,能够促进成纤维细胞的增殖并参与ECM的生成、积聚等功能。CTGF本身不具有抗炎和免疫抑制作用,不能替代TGF-β1的作用,只介导生物学功能。因此,影响或调节CTGF的表达可能会成为抗肝纤维化的新靶点。复方中药玉屏风散出自《究原方》,录自《医方类聚》,由黄芪、白术(炒)和防风组成,为治疗表虚自汗的经典名方,具益气、固表、止汗之功用。临床上广泛用于防治风寒感冒、上呼吸道感染、变态反应性疾病、过敏性疾病、支气管哮喘等疾病,疗效显著在抗击SARS中也曾起到积极作用。我院前期研究结果表明, YPF- P对急性实验性肝损伤小鼠具有保护作用,对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化有较好的防治作用。为进一步阐明玉屏风多糖影响肝纤维化的机制,本研究采用YPF-P体外培养细胞的实验方法,初步探讨玉屏风多糖对TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖的作用以及对Smads蛋白及其介导的信号转导通路在肝纤维化发生、发展过程中的作用。研究内容主要包括以下两个部分:1.玉屏风多糖对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞活化增殖及α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响肝星状细胞株HSC-T6分为7组:正常组、模型组、YPF-P(12.5mg/L、25 mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L),然后用MTT法检测HSC细胞增殖情况,筛选最适合剂量和时间,半定量RT-PCR技术检测HSC中α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。MTT结果显示, TGF-β1均能促进HSC的增殖,以YPF-P25,50,100mg/L能较好地抑制TGF-β1诱导的HSC的增殖,以培养48h作用最为明显。RT-PCR结果显示,YPF-P各剂量组能明显抑制α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。提示,YPF-P可抑制HSC的活化增殖及胶原分泌。2.玉屏风多糖对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞CTGF及Smad信号转导通路的影响肝星状细胞株HSC-T6用YPF-P(25,50,100mg/L)处理48h,同时设空白对照和TGF-β1干预的对照,半定量RT-PCR技术检测HSC中Smad2、Smad3、Smad7和CTGF mRNA的表达。结果显示,YPF-P各剂量组均能下调Smad2、Smad3、CTGF mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达。YPF-P可抑制HSC的活化增殖及胶原分泌,其机制可能与阻断HSC中的Smads信号转导通路有关。在此基础上,HSC-T6细胞用YPF-P(50mg/L),阻断剂SIS3(10μmol/ml)、阻断剂SIS3(10μmol/ml)+YPF-P(50 mg/L)处理48h,同时设空白和TGF-β1干预的对照,然后用Western blot方法检测HSC中CTGF蛋白的表达。CTGF蛋白表达的次序是:模型组﹥正常组﹥用药组﹥阻断剂组﹥阻断剂+用药组。YPF-P可抑制HSC的活化增殖及胶原分泌,其机制可能与阻断HSC中的Smads信号转导通路进而下调CTGF的表达有关。