【摘 要】
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目的研究PMS2表达对结肠癌细胞SW480生物学行为的影响,进一步探究PMS2、ERCC1及ERK信号转导途径的关系,为结肠癌的发生发展提供新的理论依据。方法1、采用Higene转染方法,将PMS2过表达质粒、si PMS2转入结肠癌SW480细胞中,下调和过表达目的基因PMS2,运用q PCR以及Western Blot方法验证转染效率。实验分组:（1）下调组:实验组（PMS2 inhibito
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目的研究PMS2表达对结肠癌细胞SW480生物学行为的影响,进一步探究PMS2、ERCC1及ERK信号转导途径的关系,为结肠癌的发生发展提供新的理论依据。方法1、采用Higene转染方法,将PMS2过表达质粒、si PMS2转入结肠癌SW480细胞中,下调和过表达目的基因PMS2,运用q PCR以及Western Blot方法验证转染效率。实验分组:（1）下调组:实验组（PMS2 inhibitor）、对照组（PMS2 inhibitor NC）;（2）过表达组:实验组（PMS2 mimics）、对照组（PMS2 mimics NC）。2、采用CCK8实验和平板克隆实验,检测下调组及其对照组、过表达组及其对照组细胞增殖情况;划痕实验检测迁移情况;Transwell法验证侵袭情况;CCK8实验检测顺铂对SW480细胞活力的影响并为后续实验筛选出适宜的药物浓度;流式细胞术法检测应用顺铂后凋亡情况;免疫荧光检应用顺铂后DNA损伤情况。3、通过STRING网站,对PMS2、ERCC1及ERK1/2上下游蛋白的关系进行生物信息学分析。4、q PCR和Western Blot分别检测下调PMS2后ERCC1的m RNA、蛋白表达变化,及下调ERCC1后PMS2的变化。5、Western Blot分别检测下调和过表达PMS2后ERK1/2与p-ERK1/2蛋白表达情况。检测ERK1/2通路抑制剂PD98059作用于PMS2下调后的ERK1/2、p-ERK1/2以及ERCC1蛋白表达情况。结果1、PMS2 inhibitor组与其对照组相比,在m RNA和蛋白水平上PMS2均表达降低（P＜0.05）;PMS2 mimics组与其对照组相比,在m RNA水平和蛋白水平上PMS2均表达增多（P＜0.05）,差异显著。细胞模型构建成功,可用于后续实验。2、PMS2 inhibitor组与其对照组相比,增殖、迁移、侵袭能力增强（P＜0.05）,对顺铂作用更加不敏感（P＜0.05）,顺铂作用后细胞凋亡与DNA损伤减少（P＜0.05）。PMS2 mimics与其对照组相比,增殖、迁移、侵袭能力减弱（P＜0.05）,对药物作用更加敏感（P＜0.05）,加药后细胞凋亡与DNA损伤增多（P＜0.05）。3、通过STRING网站,对PMS2、ERCC1及ERK1/2上下游蛋白的关系进行生物信息学分析,获得相应的关系网络图。PPI富集P值（PPI enrichment p-value）=2.09e-07,包含ERCC1、ERK1/2等相互作用节点数共有13个,其中ERCC1与PMS2相互作用（score=0.907）。富集的信号通路包括错配修复通路、铂类药物耐药性、结直肠癌、癌症中的途径、MAPK信号通路、细胞凋亡、m TOR信号通路、Rap1信号通路、Fox O信号通路以及PI3K-Akt信号通路。4、下调PMS2后,ERCC1的m RNA和蛋白表达均降低（P＜0.05）。下调ERCC1后PMS2的m RNA和蛋白表达未发生显著变化。5、下调PMS2后,ERK1/2与p-ERK1/2在蛋白水平上表达减少（P＜0.05）,过表达PMS2后,ERK1/2与p-ERK1/2在蛋白水平上表达增多（P＜0.05）。在下调组加入PD98059抑制ERK1/2通路后,PMS2以及ERK1/2表达未发生显著变化,p-ERK1/2以及ERCC1蛋白表达均受到抑制（P＜0.05）。结论1、PMS2的表达可影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭以及应用顺铂时的抗凋亡能力。2、PMS2与ERCC1存在互相作用关系,PMS2可调节ERCC1参与ERK信号转导通路。
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