绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起体内外细胞转化的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:zdt19880709
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绵羊肺腺瘤(OPA)是由外源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒(exJSRV)引起的一种羊的慢性、接触性、传染性、肺肿瘤性疾病。OPA的病理特征与人类细支气管肺癌很相似,所以OPA是研究人类细支气管肺癌的理想动物模型。外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)是唯一一种已知的可以自然引起肺腺癌的病毒。JSRV具有与其他逆转录病毒相似的基因结构:gag,pro,po1和env;其中囊膜基因env编码病毒的囊膜糖蛋白并存在于病毒粒子表面,负责病毒粒子与病毒靶细胞的特异性结合并发生膜融合从而使病毒粒子进入靶细胞内。外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白是引起细胞发生转化的重要物质,而小鼠可以作为研究外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白功能的良好模型。为了研究外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的功能,本实验以内蒙古地区自然感染绵羊肺腺瘤病例的绵羊病肺组织为原料,构建外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exISRV-env)的重组质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env,通过PCR、酶切和核酸测序方法鉴定重组质粒。在本研究中我们将构建好的绵羊肺腺瘤病毒真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env采用脂质体法瞬时转染NIH3T3细胞,观察是否引起细胞转化;并将转染的细胞皮下接种到裸鼠体内观察是否可以致瘤。将体内转染试剂与重组质粒混合通过尾静脉注射到BALB/c小鼠体内,通过对小鼠心、肝、脾、肺,肾切片的H.E染色观察组织形态变化;利用肺切片免疫组化实验,检测小鼠肺组织JSRV囊膜蛋白。结果显示成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env;重组质粒转染NIH3T3细胞后形成转化灶,发生恶性转化。转染的细胞注射到裸鼠体内引起裸鼠致瘤;H.E染色结果:引起各脏器出现不同程度的损伤性变化。对小鼠肺部进行免疫组化染色,发现有JSRV囊膜蛋白表达的阳性信号。本研究表明绵羊肺腺瘤囊膜蛋白可以引起NIH3T3细胞发生恶性转化,并在小鼠肺脏成功表达,本研究为进一步探讨外源性绵羊肺腺瘤病毒内蒙株exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理和致瘤作用提供实验基础。
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