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选择性栓塞肿瘤组织血管从而诱发肿瘤组织的缺血性坏死是一种很有前景的抗肿瘤策略。利用导向载体构建载体-tTF融合蛋白,将截断的组织因子tTF选择性靶向于肿瘤组织血管膜表面,可以诱发肿瘤组织血管栓塞,阻断肿瘤营养物质和氧气的供给,引发肿瘤缺血性坏死,发挥抗肿瘤作用。为了验证融合蛋白RGD-tTF选择性诱发肿瘤组织血管栓塞的活性和改进tTF融合蛋白中配体RGD与肿瘤组织血管内皮细胞标志物——整合素受体αvβ3的亲和力。我们利用PCR技术分别构建RGD、(RGD)3与tTF的融合基因,克隆基因至原核表达载体pET22b(+),通过优化其表达条件,实现目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达,用镍亲和层析柱纯化目的蛋白。凝血实验和FⅩ活化实验证实两种融合蛋白均保留tTF部分活化FⅩ和引发血液凝固的的活性;间接ELISA显示两种融合蛋白均能与αvβ3特异性结合,且(RGD)3-tTF对αvβ3的相对亲和力为32.4μg/mL,而此OD405nm时的RGD-tTF浓度则为44.5μg/mL。体内实验显示两种融合蛋白均能有效抑制鼠源性肝癌H22和鼠源性肉瘤S180的生长。在H22小鼠模型中,RGD-tTF的抑瘤率为37.6%,(RGD)3-tTF的抑瘤率达到62.6%;在S180小鼠模型中,RGD-tTF与(RGD)3-tTF的抑瘤率则分别为59.4%和60.3%。组织学观察发现两种融合蛋白均能选择性定位于肿瘤组织,并选择性诱发肿瘤组织血管栓塞,导致肿瘤细胞坏死,而对正常组织没有毒副作用。总之,我们通过基因工程技术成功地构建了RGD和(RGD)3与tTF的融合基因,并在原核表达体系获得高效表达。融合蛋白RGD-tTF和(RGD)3-tTF具有显著的选择性诱发肿瘤组织血管栓塞的活性与抑制肿瘤生长的作用,其中以融合蛋白(RGD)3-tTF活性为强。这些为给肿瘤血管靶向治疗提供新的药物奠定了基础。