猫细小病毒的分离鉴定及其IgG F(ab)’2的制备、检验和防治效果的初步评价

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猫泛白细胞减少症(Feline panleucopenia,FPL)是由猫细小病毒(Feline parvovirus virus,FPV)引起的一种急性、烈性传染病,是引起猫科动物的主要传染病之一,主要感染幼龄猫科动物。因其传染速度快、传播范围广,给宠物猫及野生猫科动物行业带来了严重的经济损失。FPV主要在动物肠道内复制,可引起动物严重腹泻,严重者便血,常伴随白细胞减少、肠绒毛退化,具有高度传染性,该病的发病率及死亡率极高。随着近年来FPV疫苗的普遍应用,在城市中FPL的发病率明显降低,但在野生猫科动物及圈养大型猫科动物中的发病率却有所升高。目前国内外尚无直接治疗的有效药物,常采用辅助治疗,纠正其脱水、电解质平衡、防止细菌继发感染。因动物存在个体差异,不能保证患病动物全部康复。现阶段所面临的问题是研制有效的肠道定植治疗药物,降低死亡率,减少损失。本研究采集吉林农业大学动物医院疑似FPV感染的3月龄幼猫肛门拭子,利用F81细胞分离到1株病毒。通过形态学观察、血凝与血凝抑制试验、PCR鉴定、直接免疫荧光试验、全基因序列测定及遗传进化分析,确定分离到的病毒为猫细小病毒。为了获得高效价的猫细小病毒特异性IgG F(ab)’2,本研究以猫作为免疫动物制备高免血清。通过ELISA方法监测免疫猫血清抗体效价,当效价趋于稳定时收集血清。使用饱和硫酸铵法提取IgG,浓缩后使用胃蛋白酶酶切,Protein A层析柱制备F(ab)’2,利用SDS-PAGE检测其纯度,测定其中和效价为1:928。根据《中华人民共和国药典》相关规定对其进行无菌检验及安全性检验,均符合要求。将制备的F(ab)’2应用于动物紧急预防及治疗性试验,每天记录实验猫体温、体重、临床症状,采集猫肛门拭子进行排毒量检测。综合试验结果证明了本研究所制备的猫细小病毒特异性抗体F(ab)’2可缓解发病动物临床症状,延长其生存时间,为猫细小病毒肠道定植制剂的研发提供试验资料。
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