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食用菌富含人类需要的多种营养成分,不仅是健康食品,也是人们研究天然产物的重要来源。滑菇味道鲜美,目前对滑菇多糖的研究较为深入,据报道其活性主要表现在免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和抗菌上,但对滑菇蛋白及其抗HIV-1的研究并未涉及,而已有研究表明抗氧化和抗HIV-1之间存在着密切的关系,因此本课题以滑菇子实体为研究对象,以抗氧化为筛选指标,围绕其抗氧化蛋白的分离纯化、生物活性进行研究。
首先用蒸馏水低温浸提滑菇子实体干粉,再用硫酸铵沉淀,透析除盐后获得蛋白粗提物A。后续分级分离纯化依次使用DEAE-Cellulose阴离子交换层析、CM-Sepharose阳离子交换层析、Sephadex G75凝胶层析进行除杂和有效成分的富集,最终得到蛋白G1,回收率为0.078%。
蛋白G1经过SDS-PAGE和Native-PAGE电泳分析推测其为单亚基蛋白,分子量为28.6kDa。通过Edman降解法测定N端序列为AGFVNGITLN,结合二级质谱的数据库比对分析,推测该蛋白是一种未见报道的新型蛋白。
在抗氧化活性测定中,当G1浓度为250μg/ml时,其抑制小鼠红细胞溶血的活性为81.7%,抑制脂质过氧化的活性为19.4%;对自由基清除活性的测定结果显示,G1具有较强的羟基自由基清除活性,在33.3μg/ml时达到91.7%。
在以HIV-1蛋白酶为靶标的抗HIV-1作用研究中,G1在25μg/ml的浓度下对HIV-1蛋白酶的抑制活性达到18.5%,高于正对照HIV-1蛋白酶抑制剂pepstatinA(7.4%)。当浓度在25μg/ml以下时,对HIV-1蛋白酶的抑制活性显示浓度依赖性。
本研究从抗氧化活性、抑制HIV-1蛋白酶活性两方面对滑菇中的蛋白进行了研究,实验证明抗氧化与抗HIV-1蛋白酶活性之间存在一定的相关性,该项研究有助于食用菌资源的开发利用,并为多效抗HIV-1药物的研发奠定了理论基础。