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背景:脑胶质瘤是中枢神经系统中发病率最高的恶性肿瘤,约占成年人所有颅脑肿瘤的81%。胶质瘤恶性进展迅速,侵袭性强,且呈高浸润性生长,因而手术几乎无法保证肿瘤的完全切除。尽管术后辅以放疗以及药物化疗,患者中位生存期仍不足一年,预后极不理想。因此,寻求新的治理手段以及新型抗胶质瘤药物是目前脑胶质瘤研究领域的热点问题。圣草酚(Eriodictyol,ERD),是一种天然的黄酮类化合物,广泛分布于各种水果、蔬菜和部分中草药中。近年来,国内外研究表明,圣草酚具有良好的抗炎、抗氧化和神经保护等药理活性,但其抗肿瘤作用却鲜有报道。
目的:本研究的目的是探索圣草酚对人脑胶质瘤细胞的作用及相关分子机制,为研发新型抗胶质瘤药物提供参考。
方法:首先,不同器官不同组织来源的肿瘤细胞(胶质瘤细胞系U87MG、肺癌细胞系NCI-H1975、结肠癌细胞系HCT116、肝癌细胞系HepG2、胰腺癌细胞系PANC1以及乳腺癌细胞系CAL148)经圣草酚(ERD)处理后,使用CCK-8法检测ERD对肿瘤细胞活力的影响;其次,进一步使用CCK-8法检测不同处理时间ERD对胶质瘤细胞的作用,并观察ERD对正常小鼠脑胶质细胞的影响。然后,通过克隆形成实验,细胞划痕实验,Transwell实验,分别检测ERD对胶质瘤细胞克隆形成能力、侵袭和迁移的影响;随后,通过流式细胞术检测ERD对胶质瘤细胞周期的影响;通过Hoechst33342、TUNEL以及流式细胞术检测ERD对胶质瘤细胞凋亡的影响;运用RT-qPCR检测ERD处理后胶质瘤细胞中凋亡相关蛋白mRNA的表达水平;运用Westernblot检测凋亡相关蛋白以及PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白的表达情况;通过分子对接技术探究ERD与PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白的结合情况。最后,通过裸鼠皮下移植瘤模型评价ERD的体内抗胶质瘤效果。
结果:ERD具有广泛的抗肿瘤活性,其中对胶质瘤的抑制作用最为明显。ERD可以有效抑制胶质瘤细胞增殖,并且呈浓度依赖性。细胞划痕和Tranawell实验结果表明,ERD能够抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移。流式细胞术检测细胞周期发现,经ERD处理后胶质瘤细胞发生S期阻滞。通过Hoechst33342、TUNEL和流式细胞实验发现ERD能够显著诱导胶质瘤细胞凋亡,进一步研究发现ERD上调了促凋亡蛋白Bax的表达并使PARP、Caspase3、8、9活化,以及下调了抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达水平。此外,还发现经ERD处理后胶质瘤细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制,且合并使用PI3K抑制剂后,该抑制作用被加强,而使用PI3K激动剂共处理后,减弱了ERD对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的抑制作用。分子对接实验结果表明ERD能够与PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白发生结合;以上结果说明,ERD可能通过下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路起到了促进胶质瘤细胞凋亡的作用。最后,通过裸鼠皮下移植瘤模型我们验证了ERD在体内同样具有抗胶质瘤作用,并能够诱导其发生凋亡。
结论:本研究证实了圣草酚能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,并通过下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路促进了胶质瘤细胞的凋亡。这些研究结果完善了人们对圣草酚药理作用的认知,并为进一步探究圣草酚作为潜在的抗胶质瘤药物提供了前期理论基础。
目的:本研究的目的是探索圣草酚对人脑胶质瘤细胞的作用及相关分子机制,为研发新型抗胶质瘤药物提供参考。
方法:首先,不同器官不同组织来源的肿瘤细胞(胶质瘤细胞系U87MG、肺癌细胞系NCI-H1975、结肠癌细胞系HCT116、肝癌细胞系HepG2、胰腺癌细胞系PANC1以及乳腺癌细胞系CAL148)经圣草酚(ERD)处理后,使用CCK-8法检测ERD对肿瘤细胞活力的影响;其次,进一步使用CCK-8法检测不同处理时间ERD对胶质瘤细胞的作用,并观察ERD对正常小鼠脑胶质细胞的影响。然后,通过克隆形成实验,细胞划痕实验,Transwell实验,分别检测ERD对胶质瘤细胞克隆形成能力、侵袭和迁移的影响;随后,通过流式细胞术检测ERD对胶质瘤细胞周期的影响;通过Hoechst33342、TUNEL以及流式细胞术检测ERD对胶质瘤细胞凋亡的影响;运用RT-qPCR检测ERD处理后胶质瘤细胞中凋亡相关蛋白mRNA的表达水平;运用Westernblot检测凋亡相关蛋白以及PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白的表达情况;通过分子对接技术探究ERD与PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白的结合情况。最后,通过裸鼠皮下移植瘤模型评价ERD的体内抗胶质瘤效果。
结果:ERD具有广泛的抗肿瘤活性,其中对胶质瘤的抑制作用最为明显。ERD可以有效抑制胶质瘤细胞增殖,并且呈浓度依赖性。细胞划痕和Tranawell实验结果表明,ERD能够抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移。流式细胞术检测细胞周期发现,经ERD处理后胶质瘤细胞发生S期阻滞。通过Hoechst33342、TUNEL和流式细胞实验发现ERD能够显著诱导胶质瘤细胞凋亡,进一步研究发现ERD上调了促凋亡蛋白Bax的表达并使PARP、Caspase3、8、9活化,以及下调了抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达水平。此外,还发现经ERD处理后胶质瘤细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制,且合并使用PI3K抑制剂后,该抑制作用被加强,而使用PI3K激动剂共处理后,减弱了ERD对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的抑制作用。分子对接实验结果表明ERD能够与PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白发生结合;以上结果说明,ERD可能通过下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路起到了促进胶质瘤细胞凋亡的作用。最后,通过裸鼠皮下移植瘤模型我们验证了ERD在体内同样具有抗胶质瘤作用,并能够诱导其发生凋亡。
结论:本研究证实了圣草酚能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,并通过下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路促进了胶质瘤细胞的凋亡。这些研究结果完善了人们对圣草酚药理作用的认知,并为进一步探究圣草酚作为潜在的抗胶质瘤药物提供了前期理论基础。