阿维菌素对几种淡水生物毒性及在异育银鲫体内药物代谢动力学

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阿维菌素类药物(Avermectins,AVMs)是由阿维链霉菌素通过自然发酵产生的一类大环内酯类抗生素,包括阿维菌素(Avermectin/Abamectin,AVM/ABM)和伊维菌素(Ivermectin,IVM)等,由于其具有化学结构新颖、作用机制独特、优异的驱虫活性和较高的安全性,被广泛应用于农业和畜牧业中。一方面,阿维菌素作为农药,喷洒的农药随着大气或是地表径流等进入水环境;另一方面,阿维菌素作为兽药,通过多种给药方式,大部分以原型从粪便中排除,也会对水环境产生影响。近年来,在水产养殖方面,由于环境恶化及养殖密度增大,水生生物病害日益严重,国内外水产养殖中已较为广泛地使用阿维菌素类药物控制鱼虱等寄生虫疾病的蔓延。目前,国内阿维菌素对水生生物毒性及其在水生生物体内的药物代谢动力学报道较少,因此,本论文建立了水中和异育银鲫组织中阿维菌素的测定方法,并对几种淡水生物毒性及其在异育银鲫体内的药物代谢动力学进行研究。 论文中首先建立了水中和异育银鲫肌肉、内脏(肝脏、脾脏、肾脏和肠道)、血液组织中阿维菌素的反相-高效液相色谱紫外检测法。水中样品首先利用不溶于水的二氯甲烷提取,经无水硫酸钠脱水干燥,氮气吹干,有机相溶解、滤膜过滤后进行分析。异育银鲫组织样品首先用乙腈提取,正己烷去脂肪,经无水硫酸钠脱水干燥,氮气吹干,有机相溶解、滤膜过滤后进行分析。色谱柱采用HypersilC18反相色谱柱,流动相:甲醇,水(86:14,V/V),流速1.0mL/min,紫外检测器波长245nm,进样量10μL。本方法水中阿维菌素的检测限为0.1mg/L,在2、10、20μg/mL添加浓度水平,阿维菌素的平均回收率为88.10%~94.78%。异育银鲫肌肉、内脏、血液组织中阿维菌素的检测限分别为4ng/g、4ng/g、2ng/g,平均回收率均在78.21~94.68%之间。 其次,采用每24h换液试验法,研究了阿维菌素对几种淡水生物的急性毒性。实验结果表明,阿维菌素对蚤状蚤毒性最大,其48h半致死浓度LC50和安全浓度SC分别为0.37μg/L和0.075μg/L,对异育银鲫鱼苗和鱼种、食蚊鱼、鲢鱼苗、青虾、幼蟹、圆田螺96hLC50分别为18.09μg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、19.92μg/L、0.52mg/L、0.25mg/L、0.57mg/L,安全浓度分别为5.998μg/L、0.019mg/L、0.034mgL、4.531mg/L、0.135mg/L、0.129mg/L、0.837mg/L。阿维菌素对几种淡水生物的安全浓度范围较窄,确定给药剂量时必须严格加以控制。因此本论文以异育银鲫鱼种的安全浓度0.019mg/L为标准,确定异育银鲫组织损伤实验及药代动力学实验的给药剂量。 再次,采用急性毒性实验方法,设定0.01mg/L、0.04mg/L和对照组研究了阿维菌素对异育银鲫的组织损伤。结果发现0.04mg/L浓度组:1)鳃弓软骨组织边缘细胞脱落,软骨细胞变性、溶解、形成空泡,部分软骨细胞成梭形;鳃小片增粗、弯曲、尖端膨胀,有充血现象,鳃基部上皮细胞脱落,部分鳃小片发生融合;2)肾脏中肾实质出血,肾小球及肾小管透明变性,部分肾小管上皮细胞核溶解消失,中肾管内腔有脱落的血细胞聚集;3)在肝脏中观察到部分肝细胞出现空泡变性,细胞核膜破裂、核仁溶解消失等现象,在部分鱼体中还发现单细胞坏死;4)脾脏中,网状组织增生,组织内含有大量的铁血黄素沉淀,甚至产生纤维样病变;5)脑组织中,神经细胞空泡变性,神经细胞核溶解,部分细胞核发生移位有的核移位到边缘,死亡鱼的脑组织中发现神经细胞退化。0.01mg/L浓度组的鳃、肾、肝、脾和脑的组织损伤轻微,对照组镜检未发现任何组织病变。 最后,采用药浴方式研究了阿维菌素在异育银鲫体肌肉、内脏(肝脏、脾脏、肾脏、肠道)和血液中的药物代谢动力学。药浴浓度为0.01mg/L,每24h换液1次,持续28天,第29天开始换空白水,持续14天。通过对药代动力学参数分析可知,阿维菌素均能在异育银鲫的肌肉、内脏和血液组织中富集,但不同组织对AVM的富集能力不同,AVM在内脏中的蓄积能力比较强,而在肌肉中的蓄积能力比较弱。其肌肉、内脏(肝脏、肾脏、脾脏和肠道)、血液对AVM的消除半衰期分别为4.3天、10.3天和9.9天。由于影响水生生物药代动力学的因素较多,同种药物在不同水生生物体内的药代动力学参数有很大差异。因此,建议在21~22℃,给药条件下连续药浴28天,休药期为14天。
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