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[目的]臂丛损伤是临床上常见的损伤，致残严重。臂丛根性损伤可分为节前损伤和节后损伤。节前损伤即臂丛神经根性撕脱伤，神经根在脊髓部位的丝状结构断裂，由于丝状结构断裂后在脊髓表面无残根可供缝接修复，且损坏脊神经根较长，可供移位修复的神经在数量和质量上均难以满足臂丛神经修复的需要，对手臂功能损害尤为严重。不同损伤类型治疗方法不同：节后损伤可行神经吻合或神经移植治疗；而节前损伤确诊后应及早进行神经移位手术。因此臂丛神经节前与节后损伤的准确判定，对手术方式的选择具有重要意义。对于椎孔外臂丛神经损伤可通过手术探查确诊，但椎管内神经的丝状结构是否断裂很难通过探查术来判定，除非行椎管内探查术。尽管椎管造影后CT(CTM)、B超、MRI、神经电生理等方法都能在一定程度上诊断臂丛损伤，但各有一定的局限性。所以寻找同样准确，但更快速，可用于术中快速判断臂丛损伤类型的诊断方法是臂丛损伤诊断治疗整个研究课题中的重要内容。本研究使用放射性同位素的方法快速(50min-1h)测定神经残端胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性，以期在探查手术时对神经残端的损伤类型作出判断，指导手术方法的选择。
[方法]1.动物选择与分组选用健康成年雌性SD大鼠45只，体重260～300g，编号、标记，将其中的42只随机选一侧臂丛C6神经根造成节前损伤，另一侧造成节后损伤，分别为节前损伤组和节后损伤组。损伤后分别于1d、3d、5d、7d、15d、30d及90d取材，每次取6只。另有3只作为正常无损伤对照组。即节前损伤共42个神经根，节后损伤共42个神经根。正常无损伤对照的C6神经根6个。
2.试剂及仪器乙二胺四乙酸、14C标记的乙酰辅酶A、氯化胆碱、硫酸毒扁豆碱、四苯基硼、二异丁基酮溶液、手术显微镜、显微手术器械、台式高速离心机、微量移液枪、电子天平、低温冰箱、恒温孵育箱、液体闪烁计数器。
3.大鼠臂丛损伤动物模型的制作3.1节前损伤(根性撕脱伤)雌性SD大鼠，体重260～300g，以水合氯醛腹腔注射麻醉(30mg/kg)，麻醉生效后，仰卧位，四肢牵向两侧固定于固定板，颈部及前肢备皮，常规碘酒消毒、铺巾。以下操作均在10倍手术显微镜下完成。
颈部前正中切口，由下颌至胸锁关节，长约4cm。切开皮肤、皮下组织。将胸骨乳突肌、锁斜方肌连同锁骨向下外侧牵开，向外侧牵开并保护颈总动脉，锐性切断胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌，将头直肌、颈长肌连同颈总动脉、迷走神经及气管向对侧牵开，充分暴露斜角肌并锐性切断。显露并确认C6神经根，显露C6神经根处及C5、C6椎体腹侧的右半部，清除其上附着的肌肉和韧带用自制尖头咬骨钳(持针器前端磨尖制成)咬除相应颈椎C5/6部分横突根部及部分椎弓根，以扩大C5/6椎间孔(注意保护椎动脉)，使其大于脊神经节横径。充分游离神经根，用显微剪剪除神经根周围的结缔组织，用神经拉钩紧贴椎孔，向头侧略用力缓缓牵拉C6神经根，至神经节脱出椎间孔为止，此时可见前根和后根的辫状结构，逐层缝合，关闭切口。
3.2节后损伤同上手术入路显露并确认C6神经根，在靠近椎间孔处造成C6损伤(切断)。
4.ChAT活性的测定重新按照颈前方手术入路的方法暴露臂丛神经，找到并分离出C6神经根断端。切取1.5mm神经作为标本。
标本匀浆，放入到含20μl缓冲液A(PH7.4的50mmol/L磷酸钠缓冲液，300mmol/L氯化钠，20mmol/LEDTA)的离心管内。20μl混合孵育液(0.0476μCi[1-14C]acetylCo-A，18.8μl已加入标本的缓冲液A，0.2μl1.6mmol/L氯化胆碱，lμl5mmol/L硫酸毒扁豆碱)配成后在37℃下孵育30分钟。孵育结束时加入15mg/ml的四苯基硼的二异丁基酮溶液100μl。离心(20000g)1次，2分钟。取40μl上清液(有机相)移入闪烁杯，加入10ml甲苯闪烁液。轻摇1min，，静置10分钟。
用液体闪烁计数器测量14C的放射活性，即可表示ChAT活性。结果以每分钟计数(counterperminute，cpm)表示。
5.数据统计与分析计量资料采用均数士标准差表示，多组间数据比较采用单因素方差分析，P值＜0.05有统计学意义。数据运用SPSS13.0软件包进行统计。
[结果]1)大鼠正常臂丛神经根ChAT的活性平均为(7702±1503)cpm。
2)节前损伤组，ChAT的活性1d、3d、5d、7d、15d、30d、91d后为依次为(5928±1458)cpm、(2783±808)cpm、(1021±324)cpm、(675±258)cpm、(554±213)cpm、(354±137)cpm、(328±143)cpm。从1d开始随时间降低较快，7d时降低到(675±258)cpm(约为正常的1/10)，之后ChAT活性变化较小，90d时为(328±143)cpm。数据经统计学分析表明1d组与正常组无统计学差异(P值＞0.05)，3d与1d、5d与3d有统计学差异(P值＜0.05)。5d之后维持在相对较低的水平。
3)在节后损伤组，ChAT的活性1d、3d、5d、7d、15d、30d、91d后为依次为(7541±1191)cpm、(6994±1405)cpm、(6816±1621)cpm、(6988±1524)cpm、(5884±907)cpm、(5144±1126)cpm、(4906±1119)cpm。ChAT活性在前7d基本不变，各组数据与正常组之间均无统计学差异，15d稍低为(5884±907)cpm，15d以后均与正常组之间有统计学差异，30d(5144±1126)cpm与90d(4906±1119)cpm相比无统计学差异。
4)同一时间点时节后与节前之间ChAT的活性横向比较，在1d、3d组，无统计学差异；在5d、7d、15d、30d、90d组，都有统计学差异，节后活性明显高于节前。
[结论]1.大鼠臂丛节前和节后损伤后，神经断端ChAT的活性随时间降低的速度不同，从5d后有显著差异，可以从用来区分臂丛节前节后损伤。
2.测定神经断端ChAT的活性可以用来定量地判定臂丛损伤后的神经残端的运动功能，反映神经残端的可修复性，是否可以作为修复神经缺损的运动神经修复源。
3.测定胆碱乙酰基转移酶活性的方法耗时短(50min-1h)，可以在术中快速作出诊断，具有临床实用意义。