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目的:
1.通过病例-对照和基于家系的研究方法分析2型糖尿病患者和对照组人群线粒体DNA多态性位点异质性的发生情况，探讨线粒体DNA多态性位点异质性与2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)的相关性。
2.分析线粒体DNA多态性位点异质性与T2DM慢性并发症之间的相关性，为T2DM及其并发症的遗传危险因素评估提供参考。
3、分析线粒体DNA多态性位点异质性在家系中的分布情况以及与临床表现之间的关系，以进一步验证DNA多态性位点异质性与T2DM之间的相关性。
方法:
1、标本采集:(1)散发病例对照根据美国糖尿病学会2007版糖尿病诊疗标准，选取2010年4月-2011年2月温州医学院第一附属医院确诊为T2DM的无血缘关系的患者402例（浙江籍汉族人群），排除了1型糖尿病、LADA以及其他原因引起的继发性血糖升高如Cushing综合症、巨人症等。同时收集具有母系遗传特征的糖尿病家系。对所有T2DM患者做常规生化指标检测并记录其基本临床资料（包括姓名、性别、年龄、病程、胰岛素使用情况、慢性并发症、家族史等）。对照组来自2010年11月-2010年12月温州市体检中心的体检者，包括417例年龄匹配的健康体检者、30例只合并肥胖者、31例只合并脂代谢紊乱者、25例只合并高血压者。健康体检者排除糖尿病及家族史者、口服葡萄糖耐量异常、以及高血压、脂代谢紊乱、脑血管病等代谢性疾病。只合并肥胖者是根据2000年亚太地区肥胖的诊断标准诊断为肥胖者，同时排除了糖尿病及家族史者、口服葡萄糖耐量异常、以及高血压、脂代谢紊乱、脑血管病等代谢性疾病;只合并脂代谢紊乱者是空腹血TG≥1.7mmol/l(150mg/dl)，及（或）空腹HDL-C＜0.9 mmol/l(35mg/dl)（男）或＜1.0 mmol/l(39mg/dl)（女），同时排除了糖尿病及家族史者、口服葡萄糖耐量异常、肥胖、以及高血压、脑血管病等代谢性疾病;只合并高血压者是根据2005年修订版《中国高血压防治指南》诊断为高血压者，同时排除了糖尿病及家族史者、口服葡萄糖耐量异常、肥胖、脂代谢紊乱、脑血管病等代谢性疾病。以上所有研究对象均签署知情同意书，完成流行病学调查和提供血液标本。(2)家系a、b以2010年-2011年间在温州医学院第一附属医院门诊确诊为2型糖尿病且有家族史的患者Ⅲ-1和Ⅱ-17为先证者，采用统一的家系调查表对其家系进行调查，内容包括一般情况、系谱图（图4）、T2DM病史，测量血压、身高、体重、血糖等。
2、提取所有受试者全血基因组DNA，采用PCR扩增ND2基因内能定义单倍型类群N9a2c的区段(5255-5511)，直接测序后与剑桥参考序列(revised CambridgeReference Sequence，rCRS)进行比对，根据测序峰图，对可能存在的异质性变异采用变性高效液相色谱（denaturing high performance liquidchromatography，DHPLC）技术证实。
3、应用DNAstar软件包中的Seqman和Condon code Aligner软件将测序结果与剑桥标准序列(revised Cambridge Reference Sequence，rCRS)进行比对，分析ND2基因内能定义单倍型类群N9a2c的区段(5255-5511)的变异，并结合统计学方法分析该区段位点变异与T2DM及其慢性并发症的相关性。
4、对线粒体单倍型类群N9a2c进行家系分析。
结果:
1、在402例2型糖尿病患者中检测出39例携带有G5471A、A5474G、A5498G变异，503例对照组人群中检出6例G5471A、A5474G、A5498G变异，且这三个位点均存在异质性现象。其中，在417例健康对照中未发现G5471A、A5474G、A5498G变异，在30例只合并肥胖的对照中发现2例G5471A、A5474G、A5498G变异，在31例只合并脂代谢紊乱的对照中发现2例G5471A、A5474G、A5498G变异，在25例只合并高血压的对照中发现2例G5471A、A5474G、A5498G变异。G5471A、A5474G、A5498G变异在T2DM组、肥胖组、脂代谢紊乱组、高血压组中的发生率与健康对照组比较差异有显著性(p＜0.05)。
2、在两例具有母系遗传倾向的家系调查中也发现G5471A、A5474G、A5498G同时出现的异质性现象。
3、根据有无G5471A、A5474G、A5498G变异将T2DM患者进行分组，分为肥胖组和非肥胖组，有无微血管并发症，大血管并发症，高血压等，分析结果显示BMI、收缩压水平在G5471A、A5474G、A5498G变异组明显高于非变异组(p＜0.05)，高血压病的发病率在G5471A、A5474G、A5498G变异组也明显高于非变异组(p＜0.05)。
4、在对G5471A、A5474G、A5498G变异与糖尿病慢性并发症的相关性分析中发现，G5471A、A5474G、A5498G在合并高血压组中的发生率明显高于未合并高血压组，在其他并发症分组中的差异无显著性。
结论:
1、异质性变异G5471A、A5474G、A5498G在T2DM组中的发生率明显高于对照组，同时发现G5471A、A5474G、A5498G三个位点的变异存在异质性。在两个具有母系遗传倾向的家系中也发现了G5471A、A5474G、A5498G三个异质性变异位点。推测异质性变异G5471A、A5474G、A5498G及其所定义的线粒体单倍型类群N9a2c可能会提高个体患2型糖尿病的风险。
2、异质性变异G5471A、A5474G、A5498G在肥胖组、脂代谢紊乱组、高血压组中的发生率与健康对照组比较差异有显著性，提示异质性变异G5471A、A5474G、A5498G所定义的单倍型类群N9a2c可能与体内代谢紊乱有关。
3、G5471A、A5474G、A5498G变异在合并高血压组中的发生率明显高于未合并高血压组，在其他并发症分组中的差异无显著性，说明G5471A、A5474G、A5498G变异及其定义的单倍型类群N9a2c在高血压中的作用更为显著。