【摘 要】
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沙门氏菌病是由沙门氏菌感染引起的细菌性疾病,作为一种人畜共患病,对养殖业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁人类健康。抗生素一直被用于细菌感染的治疗,但随着抗生素在各个领域的大量使用,加剧了细菌耐药性的问题,使抗生素疗法变得越来越被动。噬菌体是特异性裂解细菌的病毒,与抗生素相比,具有自我复制、特异性强、无毒性、研发周期短、生产成本低等优势。噬菌体作为一种动态实体,可以根据病原菌的数量,做出一系列的调
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沙门氏菌病是由沙门氏菌感染引起的细菌性疾病,作为一种人畜共患病,对养殖业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁人类健康。抗生素一直被用于细菌感染的治疗,但随着抗生素在各个领域的大量使用,加剧了细菌耐药性的问题,使抗生素疗法变得越来越被动。噬菌体是特异性裂解细菌的病毒,与抗生素相比,具有自我复制、特异性强、无毒性、研发周期短、生产成本低等优势。噬菌体作为一种动态实体,可以根据病原菌的数量,做出一系列的调整,有很好的适应性,作为抗生素治疗的替代方案,具有广阔的应用前景。本文利用实验室已有的沙门氏菌噬菌体,制备了沙门菌噬菌体检测板,针对从养殖企业分离的沙门氏菌,快速筛选出有效噬菌体;利用噬菌体治疗动物沙门氏菌感染,可以用于我省养禽企业沙门氏菌的防控;初步探索噬菌体生产工艺,具有重要的经济价值。利用沙门氏菌显色培养基和质谱技术从养殖企业中分离到140株沙门氏菌,制备含61株沙门氏菌噬菌体的检测板,裂解分离的沙门氏菌,选出105ys、106ys、XZ-6、CJT-6、140ys、CJZ-3、XZ-8、XFI-6、87ys、LYW前十位宽裂解谱的噬菌体。针对于不同的养殖企业选出最优的噬菌体组合,例如民和裂解率前五位噬菌体为105ys、XZ-8、87ys、XFI-9、18080,裂解率都在94%以上;益生裂解率前五位的噬菌体为105ys、106ys、XFI-6、CJT-6、87ys,裂解率都在95%以上;大象裂解率前五位的噬菌体为105ys、CJT-6、MG-1、106ys、XFI-6,裂解率都在90%以上。利用沙门氏菌噬菌体检测板,裂解大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、克雷伯菌、铜绿假单胞菌,结果均不发生裂解,说明沙门氏菌噬菌体特异性强。选择给2-3日龄的SPF鸡注射一株致病性较强的沙门氏菌SM86,然后通过注射给药方式接种噬菌体v B-Sal S-DZ,发现噬菌体可显著提高雏鸡的存活率,与对照组相比存活率可提高40%-50%,具有良好的感染治疗效果。给SPF鸡口服沙门氏菌噬菌体v B-Sal S-DZ,检测不同时间段内鸡粪样的噬菌体效价,口服噬菌体之后在0-2.5h噬菌体的效价处于上升的阶段,在2.5h噬菌体效价达到一个最高值,在120h仍检测到鸡体内的噬菌体。噬菌体v B-Sal S-DZ在肠道中的代谢时间规律具有实际应用价值,这为以后的噬菌体治疗提供了数据支持,以起到更好的治疗效果。建立了96点阵法快速测得噬菌体效价,通过对噬菌体干燥板的效价测定。结果发现:（1）噬菌体干燥板在4℃条件下比常温保持的效果要好;（2）噬菌体干燥后其原液在4℃条件下保存3个月仍有较高的效价;（3）不同的噬菌体效价变化速度不同。利用不同浓度LB培养噬菌体,发现在1/2LB、1/4LB培养基中,噬菌体效价比在LB中只降低了一个对数单位,这为以后工业上培养基的选择提供一个基础数据。通过探究不同孔径的滤膜对噬菌体效价产生的影响,发现噬菌体原液经0.22μm或0.1μm滤膜过滤后,噬菌体效价都降低了一个数量级,经100K、50K、30K、10K、3K滤膜过滤后,噬菌体效价急剧下降。因此在实验室或者工业上建议使用0.22μm孔径的滤膜,可节约成本。
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