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禽腺病毒属于禽腺病毒科禽腺病毒属,根据其抗原性的不同可分为3个群,其中Ⅰ群禽腺病毒包含12个血清型。Ⅰ群禽腺病毒含有相同的群抗原,其中比较著名的病毒株有鸡胚致死孤儿病毒、鹌鹑支气管炎病毒、鸡包涵体肝炎病毒。所有年龄的家养禽均为易感,临床和病理症候群包括肝炎、再生障碍性贫血、出血、轻度呼吸道疾病和产蛋量减少。Ⅰ群禽腺病毒既可水平传播,也可垂直传播。根据GenBank上的CELO病毒六邻体(hexon)基因序列,通过软件比较禽腺病毒hexon氨基酸序列,结合二维结构图提示的多肽暴露情况以及抗原性预测分析,设计并合成了一对特异性引物,对禽腺病毒1型CELO株的hexon主要抗原性多肽片段进行PCR扩增,与PGEX-4T-1原核表达载体连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,经0.2mmol/L的异丙基硫代-β-D-半乳糖诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子量为72.24kD,占全菌蛋白的34%。Western-blotting结果表明:原核表达的hexon重组蛋白具有抗原性,能与感染FAV的阳性血清反应。另外,分别用不同浓度的尿素和Triton X-100对hexon重组蛋白进行包涵体纯化,蛋白的终浓度为30μg/mL。经BandScan4.3生物图象分析软件分析蛋白的纯度为85.0%。达到较高的浓度和纯度,说明本试验探索的纯化方法能有效的纯化这些重组蛋白。其次,将纯化的hexon蛋白作为包被用抗原进行间接酶联免疫吸附试验(ELISA),确定其最佳包被浓度为10μg/mL;一抗稀释度为1:200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1∶5000,重组蛋白不与NDV、AIV、EDSV、ARV阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性。本研究初步建立了能检测FAV抗体的重组蛋白ELISA诊断方法,用这种方法对FAV的12个血清型病毒免疫SPF鸡的血清进行检测,结果表明该方法在FAV抗体检测方面具有较高的敏感性。最后,根据GenBank中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因的保守序列设计了一对引物,建立了检测Ⅰ群禽腺病毒12个血清型的SYBR GreenⅠ荧光PCR方法。以质粒DNA为标准品,建立了标准曲线及熔解曲线。同时进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,制作的标准曲线中各浓度范围内有较好的线性关系且线性范围宽;与AIV、IBDV等非Ⅰ群禽腺病毒不发生交叉反应,灵敏度达1×10~2拷贝/μL,表明具有较好的特异性和敏感性;重复性试验结果表明,具有良好的准确性。本方法从病毒核酸提取至检测完成仅需5h左右,操作简便快速,为快速、准确检测Ⅰ群禽腺病毒提供了一种有效的方法。