广藿香多倍体诱导与鉴定研究

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广藿香[Pogostemon cablin (Blanco) Benth.]为唇形科刺蕊草属植物,以干燥地上部分入药,其性辛、微温,是常用传统药材。近年来,由于城市发展破坏了广藿香的道地产区,多年来的无性繁殖也导致了广藿香缺少基因多样性,加之种植过程中病虫害发生率高、连作重茬严重、种质退化等问题。药用品种石牌广藿香和高要广藿香已经濒临灭绝,而原本主要用于提取挥发油的海南广藿香成为了主要栽培品种。因此培育高产、优质、遗传性状稳定的新品种是当务之急。植物多倍体具有生物量高、抗逆性强、药用活性成分含量增多等优点,为药用植物的开发与利用提供了一条新的途径。本研究围绕广藿香多倍体株系的选育,在确定了三个品种广藿香染色体数目的基础上,以道地品种石牌广藿香作为育种起始材料,利用秋水仙素成功诱导、鉴定了5个处理,共13个同源八倍体株系,并进行了品质评价分析。主要结果如下:(1)广藿香多倍体诱导利用秋水仙素处理广藿香快繁组织,分别探讨了不同处理方法(茎尖覆盖法、浸泡法和混培法)、不同诱导材料(愈伤组织、丛生芽、再生苗)、不同秋水仙素诱导浓度(0.025%~0.2%)、不同诱导时间(0~96h)对广藿香诱变率的影响。实验证明0.05%秋水仙素浸泡丛生芽72h效果较好,气孔鉴定诱导率达85%(占处理苗)。通过变异苗染色体数观察,为2n=8x=128,确定得到广藿香八倍体。同时也得到了一些嵌合体、畸形植株。秋水仙素浸泡丛生芽是获得广藿香同源八倍体的有效方法。(2)广藿香多倍体鉴定本研究先后优化了广藿香根尖染色体制片与叶片流式细胞术的实验条件,结合形态特征变化,建立了切实可行的广藿香倍性鉴定流程。经过筛选,最终获得13个广藿香多倍体株系。气孔大小、气孔密度、叶型指数是鉴定广藿香倍性较为简单有效的方法;酶解去壁低渗法处理能够获得分离度高、可用于广藿香计数的染色体;流式细胞术能够精确、高效的鉴定同质多倍体。(3)广藿香多倍体品质评价在形态学上与普通植株存在较大差异,表现为茎粗壮,叶片大而厚,颜色深,叶型指数变小。叶片下表皮气孔个体大、密度小,保卫细胞叶绿体含量高。9个多倍体株系百秋李醇平均含量都有所升高,叶绿素含量、叶绿素荧光参数也优于四倍体。初步分析,得到的广藿香多倍体株系在产量、生理水平、有效成分等方面体现优越性,尚需要进一步深入研究加以验证。
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