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目的: 通过研究Th17细胞及其细胞因子在慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织及外周血的的表达情况,探讨Th17细胞与CHB患者肝组织HBV DNA、HBVcccDNA、肝功能、及肝组织病理的关系;通过研究聚乙二醇干扰素α-2a对CHB患者外周血Th17细胞因子、肝组织中的IL-17+细胞及IL-17R+细胞以及对肝组织HBV DNA、HBVcccDN的影响和临床效果。探讨聚乙二醇干扰素α-2a在抗病毒的过程中是否也通过影响IL-17的表达,而达到免疫调节的作用。 方法: ①选择2011年2月至2013年6月HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者30例为研究对象,这些患者都在我科门诊及住院部接受了正规的治疗,年龄16-60岁,平均年龄(35.39±10.14)岁; ②所有患者均采用PEG-IFNα-2a180μg皮下注射,每周1次,疗程48周,随访24周;其中22例患者行治疗前后的肝组织穿刺病理活检。 ③采用ELISA法检测外周血IL-17基线水平及治疗24周、48周外周血IL-17的水平;用免疫组化法检测CHB患者肝细胞中Th17细胞相关IL-17+细胞、IL-17R+细胞的表达状况;通过实时的荧光定量的聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,测定了我们收集了的活体的肝组织中的HBV cccDNA及HBV DNA含量;我们同时也对其进行了一下常规病理染色,用来判定其的S(纤维化)及G(炎症)发展的程度;并在每12周检测肝肾功、血清HBV DNA、尿常规、血常规及乙肝五项等相关临床指标。 ④用SPSS17.0软件统计分析病例的一般资料、外周血Th17细胞因子、肝组织中的IL-17+细胞及IL-17R+细胞、血清HBV DNA、谷氨酸氨基转氨酶ALT、肝组织炎症、纤维化程度、肝组织HBV cccDNA及HBV DNA的变化的相关性。另选取30例健康志愿者作为对照组。 结果: 一、治疗前的结果 1.CHB患者外周血IL-17(pg/mL)的基线水平显著高于正常对照组(P<0.05),外周血IL-17的基线水平与ALT(U/L)呈正相关(r=0.935,P<0.05),与外周血 HBV DNA(lgIU/ml)、肝组织HBV DNA(lgIU/mL)及HBV cccDNA(lgcps/mg)均无明显相关(r分别为-0.10、-0.332、0.101,三者均为P>0.05)。与肝组织炎症分级显著相关(r=0.431,P<0.05),与肝组织纤维化分期无明显相关(r=0.194, P>0.05); 2.外周血IL-17基线水平与肝组织中的IL-17R+细胞表达呈正相关(r=0.659,P<0.05);与肝组织中的IL-17+细胞表达无明显相关(r=0.299,P>0.05); 3.CHB患者肝组织中IL-17+细胞比例(0.19±0.07)较正常对照组(0.009±0.002)明显升高,IL-17R+细胞比例(0.14±0.05)较正常对照组(0.004±0.0005)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝组织中的IL-17+细胞表达与肝组织中的IL-17R+细胞表达之间亦呈正相关(r=0.637,P<0.05),肝组织中IL-17+细胞表达与病理炎症分级(G)及纤维化分期(S)呈正相关(r分别为0.461、0.563,P值均<0.05),肝组织中IL-17R+细胞表达与病理炎症分级(G)及纤维化分期(S)呈正相关(r分别为0.434、0.601,P值均<0.05); 二、治疗后的结果 1.30例HBeAg阳性的CHB患者经聚乙二醇干扰素抗病毒治疗48周后,其中有26例ALT恢复正常,复常率为86.67%;血清HBV DNA转阴19例,清除率为63.33%;发生HBeAg/抗-HBe血清学上清除的7例,清除率为23.33%;经聚乙二醇干扰素治疗以后,肝组织中的炎症的级别与治疗前的结果相比较下降幅度较大,有统计学差异(P<0.05);其纤维化分期较前有所改善,(P>0.05)无统计学意义;22例CHB病患治疗前我们行肝穿刺后的肝组织中的HBV DNA水平是7.12±0.96log10,HBV cccDNA是5.39±1.161 log10,治疗后肝组织HBV DNA水平是6.99±1.7log10,HBV cccDNA是4.96±1.18log10,两者相比较均有所降低,但无明显的统计学差异(P>0.05); 2.①30例HBeAg阳性的CHB患者经聚乙二醇干扰素抗病毒治疗过程中各时间点外周血IL-17水平的变化趋势:在治疗24周,外周血IL-17水平呈下降趋势,与治疗前基线相比较差异尤为明显(P<0.01),至48周时仍有所下降,但与24周时的外周血IL-17水平相比较,差异不是很明显,但仍有统计学意义(P<0.05),其48周检测外周血IL-17水平仍高于正常对照组; ②发生HBeAg/抗-HBe血清转换CHB患者的外周血IL-17的基线水平高于 HBeAg/抗-HBe血清未转换组,但差异无统计学意义(P>0.05); ③在干扰素治疗过程中,其中发生 HBeAg/抗-HBe血清转换组在24周、48周时的外周血IL-17水平下降均明显,差异亦均有统计学意义(P<0.05),其中治疗24周时的水平较基线相比较差异更为明显(P<0.01);而HBeAg/抗-HBe血清未转换组在24周、48周时的外周血IL-17水平亦有所下降,但24周的IL-17水平与48周的IL-17水平相比较,差异无统计学意义(P>0.05); 3.①聚乙二醇干扰素α-2a治疗CHB患者48周后,肝组织中IL-17/IL-17R细胞表达均有所降低,差异比较有统计学意义(P<0.05); ②抗病毒治疗48周后,肝组织中的IL-17+细胞表达在HBeAg/抗-HBe血清转换组和HBeAg/抗-HBe血清未转换组有所降低,HBeAg/抗-HBe血清转换组组内比较有统计学差异(P<0.05),但HBeAg/抗-HBe血清转换组和HBeAg/抗-HBe血清未转换组比较无统计学意义(P>0.05); ③抗病毒治疗48周后,肝组织中的IL-17R+细胞表达在HBeAg/抗-HBe血清转换组和HBeAg/抗-HBe血清未转换组有所降低,发生HBeAg/抗-HBe血清转换组治疗48周后,差异有统计学意义(P<0.05),但没有发生HBeAg/抗-HBe血清清除组经治疗48周后,差异无统计学意义(P>0.05),且HBeAg/抗-HBe血清转换组和HBeAg/抗-HBe血清未转换组比较也无统计学意义(P>0.05)。 结论 ①HBeAg阳性的CHB患者Th17细胞及其细胞因子,可能参与了HBV感染的肝组织的损伤过程,与肝纤维化可能也有一定的关系。 ②Th17细胞的高表达及外周血 IL-17水平有可能预测PegIFN治疗后HBeAg阳性的CHB患者的病毒学应答。 ③PEG-IFN对CHB病患的肝组织中的HBV DNA,和肝组织中的HBV cccDNA都有一定的遏制作用,尤其是达到了e抗原血清学上的清除者,他们的下降的程度较大,但这个时候若停用PEG-IFN药物,对病情复发仍存在极大的风险。