LncRNA MAP3K9-DT靶向MAP3K9促进非小细胞肺癌发生发展的初步研究

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[目 的]迄今为止,肺癌仍然是全球危害人类健康的主要疾病之一,而肺癌中约有80%是非小细胞肺癌(NSCLC)。由于早期诊断困难和缺乏有效的靶向治疗药物,患者的预后往往较差。近年来,伴随着测序技术的迅猛发展,长链非编码RNA(lncRNA)在非小细胞肺癌中的调控作用也受到了越来越多的关注。目前,国内外仅有一项关于lncRNA丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9反向转录本(MAP3K9-DT)的研究,即MAP3K9-DT能够通过调控核苷酸代谢轴来促进肝癌细胞的增殖,然而其在非小细胞肺癌中的功能尚不清楚。本研究旨在检测lncRNA MAP3K9-DT在临床非小细胞肺癌样本及肺癌细胞系中的表达量,探究该基因对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学功能的影响,阐明lncRNA MAP3K9-DT调控下游靶基因丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)在非小细胞肺癌中的生物学功能及临床应用价值。[方 法]1.从云南省肿瘤医院收集2018年9月至2019年12月经病理诊断确诊为非小细胞肺癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织。2.LncRNA MAP3K9-DT和MAP3K9在非小细胞肺癌组织及癌旁组织、非小细胞肺癌细胞系A549和H1299、人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中的RNA表达量采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测。3.利用核质分离技术将A549和H1299分别分为核组分和质组分两种亚细胞成分,使用Q-PCR技术检测lncRNA MAP3K9-DT在A549和H1299细胞中的定位。4.采用蛋白质印迹技术检测MAP3K9在细胞系中的蛋白表达量及敲低lncRNAMAP3K9-DT对MAP3K9蛋白表达量的影响,采用Q-PCR技术检测敲低lncRNA MAP3K9-DT对MAP3K9 RNA表达量的影响。5.用CCK-8实验检测细胞的增殖能力。6.用划痕实验检测细胞的迁移能力。7.用transwell实验检测细胞的侵袭能力。[结 果]1.LncRNAMAP3K9-DT在非小细胞肺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.0001)。2.LncRNA MAP3K9-DT在A549和H1299中的表达量均高于BEAS-2B(P均<0.01)。3.核质分离及Q-PCR结果表明lncRNA MAP3K9-DT在A549和H1299两种非小细胞肺癌细胞系中均主要定位于细胞质。4.细胞实验表明敲低lncRNA MAP3K9-DT能够明显抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和侵袭(P均<0.05)。5.敲低lncRNAMAP3K9-DT后,MAP3K9的RNA表达量无明显变化(P>0.05),但MAP3K9的蛋白表达量明显降低(P<0.05),而敲低MAP3K9对MAP3K9-DT的RNA表达量无明显影响(P>0.05)。6.MAP3K9在临床非小细胞肺癌样本和细胞系中的表达量明显上调(P均<0.01),MAP3K9-DT与MAP3K9在RNA水平的表达量呈正相关(r=0.809,P<0.001)。7.敲低MAP3K9后,A549和H1299细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显减弱(P均<0.05)。[结 论]LncRNAMAP3K9-DT在临床非小细胞肺癌样本及肺癌细胞系中高表达,该基因高表达能够促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。LncRNAMAP3K9-DT与MAP3K9在临床非小细胞肺癌组织中的RNA表达量呈正相关,下调lncRNA MAP3K9-DT能明显抑制MAP3K9的蛋白水平,而对其RNA的表达量没有明显影响,表明MAP3K9-DT可能通过直接或间接靶向MAP3K9在非小细胞肺癌中发挥促癌作用。LncRNA MAP3K9-DT作为致癌基因有潜力成为临床诊断和治疗非小细胞肺癌的有效靶点。
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