【摘 要】
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将鸡生长与免疫抑制综合征病毒(Chicken stunt and immunosupression synd rome virus, CSISV)尿囊腔接种SPF鸡胚繁殖病毒,用差速离心法纯化病毒,用纯化的病毒免疫雌性Balb/c
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将鸡生长与免疫抑制综合征病毒(Chicken stunt and immunosupression synd rome virus, CSISV)尿囊腔接种SPF鸡胚繁殖病毒,用差速离心法纯化病毒,用纯化的病毒免疫雌性Balb/c小鼠。免疫后小鼠的脾脏细胞与NSO骨髓瘤细胞在PEG-1500的诱导下进行融合,融合率达96.88%,阳性率为4.84%。经过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆,获得了一株能分泌CSISV抗体的杂交瘤细胞-3H10。经间接ELISA测定,3H10细胞上清的效价为1：320,用3H10细胞制备的小鼠腹水效价为1：8.2×106。经连续传代、冻存、复苏,3H10杂交瘤细胞株能稳定分泌抗体(3H10-McAb).用捕获ELISA法对3H10-McAb的亚类鉴定为IgG2a；用间接ELISA法对3H10-McAb进行了特异性鉴定,结果显示,3H10-McAb不与空白尿囊液发生反应,也不与IBDV、NDV、IBV等病毒发生交叉反应；Western-blot试验证明3H10-McAb能与CSISV病毒p30蛋白发生特异反应。用制备的单克隆抗体,以单抗1：80稀释,4℃过夜；二抗1：30稀释,37℃下作用30min；DAB显色5分钟；Harrys苏木素1：5稀释后,复染25s为最佳条件。建立了HRP标记的免疫组化法,检测到人工感染CSISV的肉仔鸡肝脏和肾脏均为阳性,表明3H10-McAb能与组织中的病毒良好结合,能有效检测到感染组织中的CSISV。CSISV单克隆抗体的成功制备,为建立该病的免疫学诊断方法奠定了基础,也为进一步研究该病奠定了良好的基础。
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