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目的:本课题组前期通过两个独立高度近视人群的GWAS研究发现基因PDE4B与高度近视相关,高度近视人群中PDE4B表达低于正常人群。进一步在近视豚鼠模型中的研究发现PDE4B与近视模型具有相关性,PDE4B在形觉剥夺性近视豚鼠巩膜中表达下降,通过PDE4抑制剂可以诱导正常的豚鼠形成近视,但PDE4B在近视形成过程中的具体分子机制仍然不清楚。本实验通过研究小鼠近视模型以及小鼠成纤维细胞,人成纤维细胞研究PDE4B在近视中的变化以及胶原合成的改变。 方法:将经过屈光等参数筛选出的60只小鼠随机分为实验组和正常对照组,通过单眼形觉剥夺建立小鼠近视模型,研究PDE4B与近视的关系以及胶原蛋白的变化情况。通过蛋白印迹法(Western-blot),免疫荧光法检测小鼠巩膜以及视网膜中PDE4B,胶原蛋白的改变。通过RNA干扰下调3T3,HLF中的PDE4B,转染后的细胞通过荧光显微镜观察细胞的转染效率,经过q-PCR和Western-Blot(Wb)检测PDE4B的干扰效率,通过q-PCR和Wb检测胶原mRNA和胶原蛋白的表达情况,通过ELISA检测细胞内cAMP的表达情况。 结果:在小鼠的巩膜,眼外肌和视网膜中PDE4B均有表达,在小鼠的单眼形觉剥夺中剥夺眼的巩膜中PDE4B的表达较对侧眼和正常对照眼有所下降。Ⅰ型胶原蛋白主要现在小鼠巩膜和眼外肌中表达,在视网膜和视神经中几乎没有表达,小鼠后极部巩膜中Ⅰ型胶原的表达剥夺眼较对侧眼和正常对照眼的巩膜胶原降低。在细胞实验中发现人为下调PDE4B后3T3细胞中的cAMP含量升高,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达下降,同时Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原,以及Ⅴ型胶原/Ⅰ型胶原的mRNA水平升高,这与之前的研究发现一致。同时通过HLF-1进行了以上研究,发现在PDE4B下调后细胞中cAMP上调,Ⅰ型胶原的mRNA,和蛋白水平都有所下调。 结论:在小鼠近视的发生过程中,巩膜中的PDE4B表达有所下降,同时伴随着Ⅰ型胶原水平降低。在小鼠成纤维细胞中下调PDE4B可以通过增加cAMP下调胶原的表达。同时Ⅲ型和Ⅴ型胶原与Ⅰ型胶原的比例升高。同时在人胚肺成纤维细胞中进行了以上的细胞实验,发现下调的PDE4B通过升高细胞内cAMP的表达从而下调胶原的表达。结合以上实验结果PDE4B通过cAMP调控小鼠巩膜中胶原的合成促进近视的形成。