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亚油酸是一种人体必需脂肪酸,在机体内含量极为丰富,具有降血脂、降血压、防治心血管疾病的功效,还参与了人体物质循环和免疫调节。亚油酸的化学结构中含有不饱和双键,因此极易被氧化,而脂肪酸氧化产物与动脉粥样硬化、癌症和神经退行性疾病都有一定的联系。关于亚油酸氧化的机理目前已基本阐明,然而,关于亚油酸氧化产物的生物活性的研究十分有限。本试验的目的在于探明亚油酸氧化产物对生物大分子的氧化损伤作用,利用巨噬细胞RAW264.7来分析亚油酸氧化产物对炎症的诱导作用,并从MAPK细胞信号通路入手,探究氧化产物对细胞的调控作用。本试验采用Fe2+/抗坏血酸体系来诱导亚油酸的氧化,通过共轭二烯和TBARS值的测定来监控氧化体系的变化趋势,结果表明,随着反应时间的延长,共轭二烯值先上升后下降,TBARS值持续上升,说明在反应初期,氢过氧化物大量生成,随着反应进行,氢过氧化物分解并生成醛类等终产物。为了检测亚油酸氧化产物对生物大分子的影响,我们将氧化产物分别与蛋白质和DNA共同孵育,电泳分离氧化产物后可以观察到,亚油酸的氧化产物可以造成蛋白质的交联和羰基化,且反应3天和5天的产物都有极显著的效果;反应5天的产物可以造成DNA的氧化损伤,且主要是造成DNA的断裂。本试验还从细胞水平上观察了亚油酸氧化产物对巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响。通过检测活性氧的生成和COX-2的表达来评价亚油酸氧化产物的促炎效果,结果显示,第5天氧化产物具有最强的促进活性氧生成效果和诱导COX-2高表达的作用。之后单独使用第5天氧化产物进行机制的研究,结果表明,该氧化产物不仅可以剂量依赖性的诱导活性氧生成和COX-2表达,还诱导了MAPK通路中ERK, JNK, p38的磷酸化,此外,该产物还促使HO-1的表达,另一方面,该产物极显著的抑制了NO的生成。但是其与LPS诱导炎症的机制中存在的不同尚不能解释。综上所述,本试验证明了亚油酸的氧化产物具有极强大的体外生物活性,并能够诱导巨噬细胞发生炎症反应,揭示了亚油酸的氧化对机体造成的可能性伤害,为亚油酸功能营养的研究提供了理论依据。