鸡源益生菌BL-Y-1菌株分离鉴定、发酵条件及其耐受性研究

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因抗生素滥用而导致的毒性残留、耐药性等问题己引起人们的广泛关注。寻找安全、无毒的替代品迫在眉睫。长期的生产实践及大量研究表明,多种芽孢杆菌对动物正常生理状态的维持和生长繁殖都有重要意义。芽孢杆菌不仅有抑制常见病原菌生长的能力,还能产生多种营养物质,是益生菌菌种开发的重要来源。近二十年对活菌制剂的研究有了很大的发展。但由于活菌制剂在加工、使用、保存、运输过程中容易失活,从而使生物活性降低,而且有些菌株在通过胃内低pH环境时,不能有效地抵抗盐酸、胆盐等作用,不能到达肠道而发挥作用,所以开发一些能够耐高温、低pH、胆酸盐,具有较好粘附性能的菌株成为当务之急。理想的益生菌菌株最好来自同种动物的肠道,本研究正是基于这一理论基础,以健康仔鸡肠道为菌源,对附着其上的有益菌进行分离鉴定,就所获得的菌株的安全性、抑菌性、耐受等特性进行研究,同时还就优化的菌株进行了初步应用。本研究成功地从人工饲养的健康仔鸡的大肠中分离出1株对大肠杆菌(E.coli)有较强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Y-1,对该菌株进行了菌落形态、培养特征观察和生理生化特性鉴定及16S rDNA序列的分析。其中与11个芽孢杆菌属的菌株的16S rDNA序列的同源性为94. 63 %~99.35 %,Y-1被鉴定为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。并且模拟体内高胆盐环境(胆盐含量0.3%),检测菌株的耐受能力;测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活菌数。试验结果表明,Y-1在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力。为了提高Brevibacillus laterosporus Y-1菌株发酵产量,对Brevibacillus laterosporus Y-1菌株发酵培养基所需的碳源、氮源、无机盐进行了筛选,并采用正交试验法,对培养基的组成以及发酵条件进行了优化,最终确定摇瓶最适发酵培养基为:葡萄糖20 g·L-1,胰蛋白胨5 g·L-1,KH2PO4 2 g·L-1,CaCl2 0.25 g·L-1,MgSO4 0.5 g·L-1。最适发酵条件为:培养基初始pH 7.2,接种量8%,于35℃,180 r/min摇床振荡培养16h。经过发酵优化OD值增加到1.1。本试验探讨芽抱杆菌作为益生菌类饲料添加剂对1~28日龄艾维因肉仔鸡的生产性能、肠道微生态平衡的影响,以及芽抱杆菌在肉仔鸡1~28日龄时对大肠杆菌的控制效应。在探讨益生菌在动物饲料中应用的同时,探讨其作用机理,为益生素在生产上的应用提供理论支持。成功分离出鸡源的益生菌种,不但能够解决禽用益生菌的来源与应用对象一致性问题,而且只有这样才能增强益生菌功效的特异性和针对性,同时提高益生菌产品的质量和安全性,更有利于益生菌在养殖业及畜禽疾病防治中的广泛应用。对动物微生态制剂而言,在注重效果的同时还要考虑经济价值等问题。本实验通过鲜菌饲喂效果的积极尝试,希望能转变成一项简便、经济、实用、易于推广的应用技术,更好地应用于生产实践中,益生菌的联合应用为抗感染复合微生态制剂的研制做了大量的前期工作。
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