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目的复发性自然流产(RSA)发病率占育龄夫妻总数的1%～2%,是目前难治性不育中亟待解决的问题,60%-70%为不明原因复发性自然流产(URSA组),近来研究认为免疫学因素是重要原因之一。自然杀伤(NK)细胞是一种重要免疫细胞,其中NK细胞CD56+CD16亚群主要起免疫调节作用,妊娠相关蛋白A(PAPP-A)是产生于合体滋养层细胞和蜕膜细胞的一种免疫抑制因子,对URSA组患者联合检测外周血NK细胞CD56+CD16-亚群及PAPP-A水平,分析与URSA组的相关性,为从免疫学角度进一步寻找和开发URSA组治疗新方案提供重要理论基础。方法应用流流式细胞学检查技术及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测URSA组、明确原因复发性自然流产(CRSA)组及正常早孕(NEP)组三组外周血NK细胞CD56+CD16-亚群百分比及PAPP-A水平,应用ANOVA检验分析其差异显著性,运用pearson相关分析了解NK细胞CD56+CD16-亚群百分比及PAPP-A水平的相关性。结果1.外周血NK细胞占淋巴细胞百分比检测结果：URSA组、CRSA组、NEP组外周血NK细胞占淋巴细胞百分比检测结果：CRSA组、URSA组、NEP组NK细胞占淋巴细胞百分比分别为(13.77±1.53)%、(13.97±1.60)%、(13.65±1.74)%,,3组比较差异无统计学意义(F=0.287,P=0.751>0.05)。2.外周血NK细胞亚群百分比检测结果：2.1 CD56+CD16-百分比：URSA组与CRSA组与NEP三者间方差齐性,三组间比较差异有显著性统计学意义(F=182.587,P=0.000<0.05)。三组之间两两比较：URSA组与CRSA组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05)；URSA组与NEP组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05); CRSA组与NEP组比较差异无统计学意义(P=0.508>0.05)。2.2 CD56+CD16+百分比：URSA组与CRSA组与NEP三者间方差齐性,三组间比较差异有显著性统计学意义(F=126.534,P=0.000<0.05)。三组之间两两比较:URSA组与CRSA组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05)；URSA组与NEP组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05); CRSA组与NEP组比较差异无统计学意义(P=0.452>0.05)。2.3 CD56-CD16+百分比：URSA组与CRSA组与NEP三者间方差齐性,三组间比较差异有显著性统计学意义(F=56.879,P=0.000<0.05)。三组之间两两比较：URSA组与CRSA组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05);URSA组与NEP组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05); CRSA组与NEP组比较差异无统计学意义(P=0.240>0.05)。3. URSA组、CRSA组及NEP组三组外周血PAPP-A、β-HCG和P的水平的比较：3.1PAPP-A的水平比较：URSA组与CRSA组与NEP三者间方差齐性,三组间比较差异有显著性统计学意义(F=182.587,P=0.000<0.05)。三组之间两两比较：URSA组与CRSA组比较差异有显著统计学意义(P=-0.000<0.05)；URSA组与NEP组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05); CRSA组与NEP组比较差异无统计学意义(P＝--0.508>0.05)3.2 p-HCG的水平比较：URSA组与CRSA组与NEP三者问方差齐性,三组间比较差异有显著性统计学意义(F=56.534,P=0.000<0.05)。三组之间两两比较:URSA组与CRSA组比较差异有显著统计学意义(P=0.005<0.05);URSA组与NEP组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05); CRSA组与NEP组比较差异有统计学意义(P=0.000<0.05)。3.3 P的水平比较：URSA组与CRSA组与NEP三者间方差齐性,三组间比较差异有显著性统计学意义(F=157.636,P=0.000<0.05)。三组之间两两比较：URSA组与CRSA组比较差异无统计学意义(P=0.155>0.05); URSA组与NEP组比较差异有显著统计学意义(P=0.000<0.05); CRSA组与NEP组比较差异统计学意义(P＝-0.000<0.05)。4.URSA组、CRSA组及NEP组三组CD56+CD16-百分比及PAPP-A水平的相关性分析对URSA组外周血PAPP-A、D56+CD16-进行pearson相关分析,r=0.853；CRSA组外周血PAPP-A、CD56+CD16-进行pearson相关分析,r=0.973；对NEP组外周血PAPP-A、CD56+CD16-进行pearson相关分析,r=0.922。说明PAPP-A与CD56+CD16-呈正相关。结论本研究通过比较CRSA组、URSA组、NEP组3组NK细胞占淋巴细胞百分比P>0.05。显示无论在CRSA组患者、URSA组患者或NEP组对照妇女中,外周血NK细胞水平并没有明显差异。URSA组外周血NK细胞CD56+CD16+亚群百分比明显高于CRSA组、NEP组,表明URSA组患者由于NK细胞活性增强导致对胚胎的免疫杀伤作用增强从而引起流产。NK细胞活性功能在URSA组中起到了关键的作用。检查NK细胞亚群百分比有助于有RSA妇女孕期监测；NK细胞亚群百分比变化能预测妊娠结局。本次研究通过比较URSA组、CRSA组及NEP组外周血PAPP-A水平,URSA组与CRSA组比较有差异,说明了说明了PAPP-A在URSA组发病机制中是一个重要的免疫因素。CRSA组与NEP组比较有差异,说明了CRSA组的明确原因也可致免疫异常,但不是主要原因。发现了不良妊娠结局中的低P和低β-HCG水平,低水平的PAPP-A与低水平的β-HCG趋向一致。说明监测外周血PAPP-A水平能预测妊娠结局。PAPP-A、P和P-HCG在早期诊断和治疗RSA中有一定的临床指导价值。尤其是URSA组患者中PAPP-A低水平,为免疫学治疗改善妊娠结局提供理论依据。对URSA、CRSA、NEP三组各组内PAPP-A水平与CD56+CD16-百分比相关性分析,发现：URSA组、CRSA组及NEP组,各组内PAPP-A水平与CD56+CD16.百分比呈正相关,在URSA组、CRSA组低水平的PAPP-A与低水平的CD56+CD16-百分比趋向一致,说明PAPP-A与CD56+CD16-在RSA发病机制起着协同的作用。CRSA组的主要原因为胚胎染色体异常,外周血CD56+16-百分比可作为染色体正常妊娠发生生化妊娠和自然流产的预测指标,CD56+16-百分比正常而PAPP-A低于正常的自然流产患者很大可能存在染色体异常。综上所述,监测外周血NK细胞CD56+16-亚群百分比及PAPP-A水平可预测妊娠结局,外周血NK细胞CD56+16-亚群及PAPP-A在RSA发病机制中起着协同的作用,为从免疫学角度调节外周血NK细胞CD56+CD16-亚群百分比及/或运用重组PAPP-A制剂来治疗URSA提供重要的理论依据。