第一部分：大鼠小体积肝移植术后肝衰竭模型的建立　　 目的:在对大鼠肝脏解剖进行深入研究的基础上,摸索大鼠部分肝移植术后发生肝衰竭的体积范围,并比较两种不同的30％体积肝获取方法,从而建立理想的小体积肝移植术后肝衰竭的动物模型。　　 方法:以经典“二袖套”法非动脉化大鼠原位肝移植技术为基础,结合规则性肝叶切除技术,建立大鼠小体积肝移植术后肝衰竭模型。试验分为6组:Ⅰ:解剖观察组(n=20);Ⅱ组(n=20):大鼠全肝移植组;Ⅲ组(n=20):大鼠50％体积肝移植组;Ⅳ:以中肝叶为供肝的大鼠30％体积肝移植组(n=20);Ⅴ组:以右叶+尾状叶为供肝的大鼠30％体积肝移植组(n=20);Ⅵ组:70％肝切除组(n=10)。比较各组一周生存率,比较Ⅵ组和Ⅴ组术中相关模型参数及术后并发症。　　 结果:Ⅳ组和Ⅴ组一周生存率明显低于其他各组,与Ⅳ组相比,Ⅴ组切肝时间明显缩短,术后血管扭曲和狭窄等并发症发生几率明显降低。　　 结论:大鼠30％体积肝移植术后大鼠发生肝衰竭,一周生存率明显著降低。保留右叶+尾状叶作为供肝的模型术后并发症少,是理想的肝移植术后大鼠发生肝衰竭的动物模型。　　 第二部分:骨髓基质干细胞输注治疗大鼠小体积肝移植术后肝衰竭　　 目的:探讨骨髓基质干细胞输注治疗大鼠小体积肝移植术后肝衰竭的可行性及进行初步疗效观察　　 方法:体外分离、纯化、扩增、鉴定大鼠骨髓基质干细胞,采用PKH26对骨髓基质干细胞进行体外标记,比较不同标记方法、不同标记浓度的效果。120只雄性SD大鼠随机分为对照组和治疗组,对照组于移植肝复灌即刻自尾静脉注入PBS0.5ml,治疗组于移植肝复灌时自尾静脉注入含5×105骨髓基质干细胞的PBS0.Sml。于术后1,2,3,5,7天取血液及肝脏标本,观察一周生存率、ALT/AST、肝脏病理、移植肝增生速度、标记细胞在肝脏及脾脏随时间变化的分布规律。　　 结果:P4骨髓基质干细胞纯度达到90％以上。采用贴壁染色、中剂量组染色浓度可以达到最好的体外标记效果。治疗组一周生存率高于对照组,术后3,5,7天ALT/AST低于对照组,术后3,5天肝脏增生体积大于对照组。标记的干细胞在肝脏开始分布在大血管周围,此后逐渐进入肝实质中弥散分布;脾脏中标记的干细胞随术后时间延长而显著减少。　　 结论:骨髓基质干细胞输注可以减轻移植肝损伤,促进移植肝再生,输注的基质干细胞能向肝脏定向归巢并在肝实质内均匀分布。　　 第三部分:小体积肝移植后肝脏前体细胞激活增殖的实验研究　　 目的:探讨30％体积肝移植后肝脏急性损伤以及干细胞激活增殖的情况。　　 方法:200只雄性SD大鼠分为全肝移植组(WLT),70％肝切除组(PH),30％体积肝移植组(SLT)。观察各组一周生存率,并在术后1,2,3,5,7天取血液及肝脏标本行生化检测观察肝功能指标,H&E染色评估肝脏损伤情况,PCNA染色测定肝脏细胞增殖指数,CD90及OV-6免疫组化及免疫荧光染色观察肝脏前体细胞激活增殖情况。　　 结果:SLT组大鼠一周生存率显著低于WLT及PH组(50％ vs100％,100％。P<0.01)。SLT组大鼠死亡时间集中在术后2-3天。术后1,2,3,5,7天,SLT组大鼠谷丙转氨酶,谷草转氨酶均显著高于其他两组(P<0.01)。术后1,2,3天,SLT组大鼠肝脏细胞增殖显著指数低于PH,且该两组在各时间点均高于全肝移植组(p<0.01)。H&E染色显示$LT组在术后呈现出肝小叶结构不清,肝细胞片状凋亡坏死,胆管增殖,与其他两组相比肝脏损伤明显加重。免疫组化(荧光)染色显示,术后2天开始,SLT组肝脏中出现大量CD90以及OV-6阳性细胞,一开始这些阳性细胞在肝脏中弥散分布,并且在高倍镜下某些OV-6阳性细胞排列成管样结构;至术后7天,CD90以及OV-6阳性细胞在SLT组中仍有表达,但其范围主要局限分布在汇管区。WLT组和PH组在术后各时间点均没有或仅有极少量阳性细胞表达。　　 结论:(1)30％小体积肝移植术后,尤其在术后2-3天,发生肝功能不全,表现为肝功能异常,肝脏结构损伤严重,从而导致一周生存率降低。(2)术后1,2,3天SLT组肝脏细胞的增殖能力较肝切除组明显降低。(3)术后2天开始,SLT组肝脏前体细胞(肝卵圆细胞)及骨髓干细胞大量激活增殖,至术后7天仍有表达,并且其分布方式随时间而发生变化。