【摘 要】
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目的探讨马尔尼菲蓝状菌(Talaromyces mameffei,TM)感染中,Dectin-1介导的Syk/NF-KB信号通路在宿主巨噬细胞活化中的作用及调控机制。方法用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞向THP-1巨噬细胞分化,并建立TM孢子和菌丝分别感染的THP-1巨噬细胞的体外模型,利用PCR芯片技术筛选其差异基因的表达;RT-qPCR和Western Blot检测THP-1巨噬细胞表面D
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目的探讨马尔尼菲蓝状菌(Talaromyces mameffei,TM)感染中,Dectin-1介导的Syk/NF-KB信号通路在宿主巨噬细胞活化中的作用及调控机制。方法用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞向THP-1巨噬细胞分化,并建立TM孢子和菌丝分别感染的THP-1巨噬细胞的体外模型,利用PCR芯片技术筛选其差异基因的表达;RT-qPCR和Western Blot检测THP-1巨噬细胞表面Dectin-1的表达水平:Western Blot检测细胞内Syk、p65和IκBα的磷酸化水平,免疫荧光检测胞浆p65蛋白的核转位;ELISA检测细胞炎症因子TNF-α和IL-8的分泌。通过慢病毒介导的siRNA技术,建立Dectin-1低表达的THP-1细胞模型,并与TM孢子共培养后,分别采用Western Blot和免疫荧光分析Syk、p65和IκBα的磷酸化水平及胞浆p65蛋白的核转位;ELISA检测细胞炎症因子TNF-α和IL-8的分泌水平。结果TM孢子或菌丝分别刺激THP-1巨噬细胞后,细胞内Dectin-1的mRNA和蛋白表达在12h内均随刺激时间延长显著升高;Syk、p65和IκBα蛋白的磷酸化随刺激时间延长而升高,但IκBα蛋白表达降低。TM孢子刺激THP-1巨噬细胞后细胞核内p65的荧光强度较对照组显著增强;细胞培养上清中炎症因子TNF-α和IL-8的含量在18h内随刺激时间延长显著升高。下调Dectin-1表达后,Syk、p65和IκBα的磷酸化均受到抑制,p65蛋白的核转位和炎症因子TNF-α、IL-8的分泌也受到抑制。结论TM感染THP-1巨噬细胞后,可通过上调其表面Dectin-1的表达,介导NF-κB信号通路的激活,诱导TNF-α和IL-8的分泌。
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