论文部分内容阅读
背景:原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是全球最常见的恶性肿瘤之一。miR-122(microRNA-122)是存在于真核生物中的一种不编码蛋白质的单链小分子RNA。近年来有一些研究表明miR-122在肝癌的发生发展中起重要的作用。目的:研究miR-122对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制,为肝癌治疗的新方法提供实验依据。方法:实验分成四组:miR-122类似物(miR-122 mimic)干预组、阴性对照(AllStars Negative Control siRNA)组、转染试剂组和空白对照组。根据试剂说明书的描述,将Allstars Hs Cell Death Control siRNA(致死性对照siRNA)转染入HepG2细胞后观察细胞凋亡情况以估计细胞转染率。MTT法测定各组细胞培养24h、48h、72h的增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞培养24h后经Annexin V染色的细胞凋亡率;半定量RT-PCR检测各组细胞培养24h后Bcl-w、Bax、caspase-9、caspase-3的mRNA表达水平;细胞免疫组化(cell immunohistochemistry)检测各组细胞培养24h后Bcl-w、Bax、caspase-9、caspase-3的蛋白表达水平。结果:普通显微镜下观察细胞转染效率达80%。(1) MTT法结果显示:miR-122 mimic干预组24h的增殖抑制率明显高于阴性对照组、转染试剂组与空白对照组(P<0.01)。miR-122 mimic干预组24h抑制率高于48h及72h。(2)流式细胞仪检测结果显示:miR-122 mimic干预组的细胞凋亡比例明显增加,与阴性对照组、转染试剂组及空白对照组比较,均具有明显差异(P<0.01)。(3)RT-PCR结果显示:与阴性对照组、转染试剂组及空白对照组比较,miR-122 mimic干预组24h的Bcl-w mRNA表达明显下调(P<0.01),caspase-9、caspase-3 mRNA表达明显上调(P<0.01),Bax mRNA表达差异无显著统计学意义(P>0.05)。(4)细胞免疫组化结果显示:与这些对照组比较,Bcl-w蛋白表达明显降低(P<O.01),而caspase-9、caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达无显著差别(P>0.05)。结论:miR-122 mimc转染到肝癌细胞HepG2中,可以抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞的凋亡。其机制可能是通过线粒体途径促进肝癌细胞凋亡。