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新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的禽类高度接触性的急性传染病,该病宿主范围广,对禽类养殖业危害极大,是家禽传染性疾病中危害最严重的疫病之一。免疫预防是我国防制该病的有效方法,其中新城疫低毒力活疫苗(LaSota)以其毒力稳定、免疫反应性好等优点被广泛应用。但目前我国对该疫苗的质量判定以纸质化的质量标准为准,缺乏实物标尺,无法控制效力检验时的随机误差,使得国内新城疫低毒力活疫苗(LaSota)效力标定值不够准确,疫苗符合质量标准但效力值参差不齐,导致不同批次疫苗免疫效果不稳定,一定程度上影响了家禽养殖业的发展。使用新城疫低毒力活疫苗(LaSota)国家标准品可以更好控制该疫苗的产品质量,实现其效力值标定的标准化。新城疫低毒力活疫苗(LaSota)国家标准品以合格的新城疫(LaSota)半成品鸡胚液为候选物,筛选后制备冻干品,最终标定其标准特性值,用于新城疫低毒力活疫苗(LaSota)效力比对、校准和质控的国家标准物质。本实验通过对候选疫苗鸡胚液制备的候选物成品小样的初步研究建立了一套新城疫低毒力活疫苗(LaSota)国家标准品的制备筛选方法,根据检验结果选定了候选批次并最终制备得该标准品成品候选物,经过基本质量检验后,进行协作标定、效力定值后即可入库发放。本研究利用3批候选疫苗半成品制备了3批候选物成品小样,经过一系列的外源病毒、无菌性、特异性、均一性等检验程序,应用严谨的统计学手段最终筛选出质量合格、均一且效力值相对较高的3#候选物用来制备国家标准品,并对其进行了实验室内部的初步效力定值(lgEID50=7.586±0.0857)。制得3#新城疫低毒力活疫苗(La Sota)标准品候选物3023支,初步检验程序均符合标准品质量标准。将标准品由安瓿抽真空熔封保存法改进为安瓿充氮气保存法,现阶段经稳定性试验证明两种保存方法在新城疫弱毒活疫苗保存稳定性方面无明显差异,从而实现了标注品的批量化制备。在对疫苗效力定值的研究过程中建立了测定疫苗中病毒载量的荧光定量RT-PCR方法,经验证该方法稳定、重复性好、敏感、特异,每瓶疫苗含有病毒拷贝数=750×10^[(46.76-Ct)/3.29],每微升模板拷贝数在5.0×102-5.0×109之间时扩增效率为1.013；用该方法检测证实效力值(lgEID50)为7.5和6.5的新城疫低毒力活疫苗(La Sota)瓶内病毒载量分别为(1.46×1011-2.78×1011拷贝)和(2.45×1010-6.0×1010拷贝),约存在1个数量级的差别,当疫苗效力值(lgEID50)为6.0(合格疫苗的最低效力值)时瓶内病毒载量为(8.51×109-2.30×1010拷贝)；对3#新城疫低毒力活疫苗(LaSota)标准品候选物小样测定病毒载量结果显示该方法测得的核酸载量与鸡胚半数感染量之间有极显著的相关关系,证明了该方法用来测定新城疫弱毒活疫苗病毒含量的可行性,每瓶病毒载量约为(1.98×1011-2.92×1011拷贝)。同时建立了测定新城疫低毒力活疫苗(LaSota)中病毒效力的细胞免疫荧光技术,该方法能有效检出1025EID50单位的新城疫病毒(La Sota),基于该方法判定的细胞半数感染量(lgTCIDso)与鸡胚半数感染量(lgEIDso)之间有显著的相关关系。