论文部分内容阅读
锌是生物体必需的微量矿物元素,在哺乳动物体内六种主要功能级别的300多种含金属的酶类功能发挥都需要锌作为主要的结构组分或是辅助因子,与机体早期发育、脑功能、骨骼快速生长、生殖健康、免疫应答功能、内分泌调节、蛋白质和核酸代谢等一系列生理活动密切相关。缺锌时,以食欲减退、生长迟缓、异食癖和皮炎为突出表现;然而机体摄入的锌过量亦会造成机体损伤。因此,研究机体锌离子转运体蛋白,探寻复杂的锌离子稳态调节系统,对维持锌离子吸收、储存和排出的平衡过程尤为重要。近年来斑马鱼已经成为新兴的发育生物学和人类疾病脊柱动物最佳模式生物之一,其在胚胎发育相关基因的功能研究和人类疾病模型的研究中具有独特的优势,例如其鱼卵体外受精、胚胎透明、器官发育迅速,可以在显微镜下观察活体动态血液循环的全过程;且每次交配产卵数量较多,可活体内进行大规模先导药物筛选等。本实验首先通过RT-PCR实验检测出ZIP7基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中持续高表达,为下一步试验提供了确实可靠的依据;接下来,我们克隆到斑马鱼ZIP7的一段序列作为探针,使用全胚胎原位杂交的方法揭示了ZIP7VmRNA在斑马鱼早期胚胎发育中的时空表达谱及其表达定位,ZIP7早胚胎12hpf表现为普遍性表,但到了24hpf以后,局限在眼睛及周边部位,提示其可能主要参与眼睛的发育。本实验通过显微注射反义寡聚核苷酸抑制ZIP7mRNA翻译,胚胎主要表现出眼睛变小、心包膜增大、脊柱弯曲等表型;而后,将克隆到的ZIP7基因表达质粒经体外转录为mRNA注射到胚胎内,能恢复因注射反义基寡聚核苷酸造成ZIP7knockdown的表型,这提示着ZIP7的确与胚胎早期发育尤其是眼睛发育相关;同样,我们用适宜浓度的锌离子培养ZIP7knockdown后的胚胎,也能部分恢复其表型;此外,对ZIP7knockdown后的胚胎进行同步光源辐射试验,可以发现,其体内锌离子分布发生了改变,头部及心脏部位锌离子含量明显减少,提示着ZIP7基因敲除胚胎的表型可能与锌离子代谢紊乱有关。我们的研究结果表明,斑马鱼ZIP7通过调控机体锌离子的摄入从而调控早期眼睛及心脏器官的发育,为锌离子转运蛋白在机体器官发育过程中的功能作用提供理论依据。