金黄色葡萄球菌是社区、医院中内源和外源性感染的主要病原菌,它致病性广,耐药性产生快;甲氧西林1959年开始用于治疗耐青霉素的葡萄球菌感染,1961年就产生了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)。近年MRSA的阳性率迅速上升,其多重耐药谱也不断扩大,再加上其耐药性传递及多重耐药谱迅速扩大的机制至今还未阐明,MRSA已成为了世界性难题。SCCmec是MRSA的耐药性基因岛,与耐药基因传递、多重耐药性关系密切,因而成为了世界性研究焦点;依据SCCmec结构的MRSA分子分型是探索SCCmec结构与MRSA的多重耐药性、耐药性传递及耐药谱扩大机制间联系的分子生物学研究手段。由于在不同国家、地区MRSA的SCCmec型别差异很大,因此对地区性MRSA进行SCCmec分型是阐明地区性MRSA的多重耐药性、耐药性传递机制及对MRSA进行有效防治的基础。本论文从临床收集了1174株金黄色葡萄球菌,用PBP2a检测法确证了686株MRSA,对其分布特点进行了分析;还用K-B琼脂扩散法和MIC法测定了其对7类抗生素的耐药性及耐药程度。本研究建立并优化了MRSA的SCCmec多位点复合PCR分型方法,该技术同时测定九个位点(A～H和M),九位点中的A、B、E、F是现有型别独有的特异性位点、G、H是区分不同亚型的鉴别位点、C、D是某些耐药性质粒的标示位点、M是判断实验有效性的阳性对照位点。经正交设计、多浓度反复测试得优化后的反应体系为:总体积50μl,含10×反应缓冲液5μl、TaqDNA酶6U、dNTP 0.2mmol/每种、MgCl2 1.5mmol、DNA模板1μl,B、E、F、H位点上下游引物浓度各200nM、A、C、G、M位点上下游引物各400nM,D位点上下游引物各800nM,预变性为94℃4 min、循环变性为94℃30 sec、退火为52℃30sec、延伸为72℃1min,30个循环,最后的延伸时间为4min。用BLAST对10个位点序列与国际基因库中相应位点及相关菌株中的基因序列进行同源性分析和单位点、多位点平行试验结果证实:位点测定准确无误,与已报导序列的同源性在93%～100%范围内,优化后的分型技术快速、高效、重复性好。用确证、优化后的多位点复合PCR技术对随机抽取的58株MRSA进行SCCmec分型,发现26株(44.8%)携带有9种新的SCCmec型/亚型(New1～9)、20株(34.5%)携带Ⅲ型SCCmec、12株(20.7%)携带Ⅳ-dcs型SCCmec。Ⅲ型SCCmec是本地的优势型别,Ⅳ-dcs型是本地区的第二大型别,本地区MRSA的SCCmec型别具有高度多态性。且携带新SCCmec型/亚型的MRSA菌株多来自门诊病人,其耐药率、耐药程度和多重耐药谱各不相同,型别间、菌株间差异较大;基因结构,除含共同位点M外,与已有型别的结构存在明显差异,其中New1型(6株)含有Ⅱ型的特异性位点B和一个Ⅲ型的mecA基因下游特异性位点F;New2型(3株)含有Ⅰ、Ⅱ型的mecA基因上游特异性位点A、B和两个Ⅲ型的下游位点F、H;New3(4株)与New2型相似,区别是缺少位点B;New4型(3株)只含Ⅲ型的两个mecA基因下游特异位点F、H,但缺少Ⅲ型的位点E和C;New5型(2株)比Ⅱ型少了C和G两个位点;New6型(2株)比New2型少两个Ⅲ型的特异性位点F、H;New7型(3株)比典型的Ⅲ型少一个下游位点F;New8型(2株)比Ⅰ型少了位点D;New9型(1株)比New8型多了一个位点C。携带Ⅲ型SCCmec的MRSA菌株主要从住院病人的呼吸道标本中检出,它们不但对常用抗生素的耐药率高,且耐药程度大、多重耐药现象严重。携带Ⅳ-dcs型SCCmec的MRSA菌株多从门诊病人泌尿、生殖道标本检出,对几类抗生素的耐药率、耐药程度、多重耐药谱均明显低于Ⅲ型株。用MVSP3.1分析软件对新SCCmec型与已有型、亚型的相关性进行聚类分析,结果各型、亚型被归聚成七个小类、四个中类、两个大类。其中New2型与New3型关联性很强,两者与New4型被归为一个小类,再与New1组成一个独立的中类,四者与已有型的关联性较远;New7型与Ⅲ、ⅢA相关性较好,一起组成一个中类;New6型、New8型与Ⅳ-dcs型、ⅣC有较好的相关性,它们一起组成一个中类;New9型与ⅢB、ⅡD型有较好的相关性,三者组成一个小类;New5型与ⅡE、ⅡC、ⅣA型有较好的相关性,四者组成一个小类。686株MRSA的流行病学分析结果显示:MRSA在医院及社区患者中的检出率相近(Ρ>0.05),分别为75.8%和78.2%;在人群间,无论男女、老幼,均有相似的阳性检出率(Ρ>0.05);在时间上,一年中第二季度的检出率最高,为89.2%,第三季度最低,为64.4%(Ρ<0.01);5年中MRSA阳性检出率增长明显,2001年有过区域性流行(Ρ<0.01);MRSA的感染部位以呼吸道、泌尿道为主(Ρ<0.01)。686株MRSA的耐药性测定结果显示:在所测定的7类常用抗生素代表性药物中,红霉素(EM)的耐药率最高,为84.8%,耐药强度也大,其MIC25超过敏感标准上线160倍;丁胺卡那霉素(AK)最低,耐药率为39.4%,其次为多西四环素(DOX),为49.7%,但两者的年增长速度快,AK已从2000年的24.2%增长到了2004年的60.6%,DOX也从33.3%增长到了70.2%(Ρ<0.01)。氯霉素(CL)、环丙沙星(CIP)耐药率的年增长趋势也明显(Ρ<0.01);对苯唑西林(OX)的耐药性高度异质,MIC的变化范围为8μg/ml～≥256μg/ml;未发现万古霉素(VA)耐药株;MRSA的多重耐药模式复杂,耐3类以上的模式有19种,比例高达96.0%,除VA外,对其它六类全部耐药的比例已达到了20.0%。本研究在国内首次用多位点复合PCR技术对MRSA进行SCCmec分型,不但探明了本地区MRSA携带的SCCmec型别种类、构成、各型的分布特点、耐药特性、多重耐药谱,还发现了9种新的SCCmec型别;同时阐明了本地区MRSA的流行现况、耐药性、耐药性发展趋势及多重耐药模式,为卫生行政部门制订有效的治疗措施和预防策略、控制MRSA的漫延和暴发流行提供了科学依据,也向医疗卫生部门和社会各界敲响了警钟,还为今后进行MRSA的多重耐药及其传递机制奠定了基础。