【摘 要】
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谷氨酸是世界氨基酸市场上销售量最大的氨基酸,年产量已达180万吨,它在食品、医药、化妆品等方面均有着广泛的应用。今天,几乎世界上所有的谷氨酸都是由发酵法而获得的。氨基酸生产的主要菌株是棒杆菌属（Corynebacteria）的菌株,谷氨酸的生产主要是应用该属中的钝齿棒杆菌（Corynebacteria.crenatum）。在国内,被应用于谷氨酸生产的菌株主要是钝齿棒杆菌T6-13及其衍生菌株。钝齿
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谷氨酸是世界氨基酸市场上销售量最大的氨基酸,年产量已达180万吨,它在食品、医药、化妆品等方面均有着广泛的应用。今天,几乎世界上所有的谷氨酸都是由发酵法而获得的。氨基酸生产的主要菌株是棒杆菌属（Corynebacteria）的菌株,谷氨酸的生产主要是应用该属中的钝齿棒杆菌（Corynebacteria.crenatum）。在国内,被应用于谷氨酸生产的菌株主要是钝齿棒杆菌T6-13及其衍生菌株。钝齿棒杆菌T6-13与谷氨酸棒杆菌ATCC13032高度同源,而谷氨酸棒杆菌ATCC13032的测序工程已经完成,因此可以参照着谷氨酸棒杆菌ATCC13032的基因序列对野生型的钝齿棒杆菌T6-13基因进行改造。odhA基因是编码α-酮戊二酸脱氢酶（α-酮戊二酸脱氢酶系中的E1亚单位）的基因。研究表明,失活odhA基因可以使得α-酮戊二酸脱氢酶系丧失了活性,阻断了细胞中α-酮戊二酸向琥珀酰COA的合成,从而积累了大量的α-酮戊二酸,有益于向谷氨酸的转化。vgb是编码透明颤藻细菌血红蛋白（Vitreoscilla Hemoglobin,VHb）的基因,研究表明,VHb在宿主细胞中的表达,可以降低细胞对溶氧的敏感程度,提高了细胞的呼吸强度,从而加快细胞的生长速度,进一步提高目的产物的产量。本研究通过应用基因工程的技术构建得到odhA基因失活的钝齿棒杆菌T6-13和插入vgb基因的odhA基因失活的钝齿棒杆菌T6-13,并且vgb基因在重组钝齿棒杆菌细胞内成功表达出具有活性的VHb蛋白。对得到的两株菌分别进行生长代谢的研究,odhA基因的失活菌株的生长速率略微有所下降,vgb基因的加入则增加了对数期菌体的数量。odhA基因的失活的钝齿棒杆菌T6-13和插入vgb基因的odhA基因失活的钝齿棒杆菌与野生菌株相比,谷氨酸的产量分别提高了 22.3%和33.5%;而带有vgb基因的odhA基因失活的钝齿棒杆菌T6-13比odhA基因的失活的钝齿棒杆菌T6-13则提高了 9.2%。本研究对进一步利用多个基因共同作用,构建谷氨酸高产的工程菌株奠定了理论基础。
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