论文部分内容阅读
【目的】研究胰岛素(Insulin)对ICR小鼠早期胚胎体外发育的影响,以探讨胰岛素在小鼠早期胚胎体外发育中的作用,为进一步优化胚胎体外培养体系提供理论和实验依据。【方法】取ICR小鼠胚胎随机分为实验组与对照组在体外连续培养(所用基础培养基为mKSOM),观察囊胚率、孵化率和囊胚细胞数。实验一:观察不同浓度胰岛素对小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响。实验共分六组:1组为对照组,培养基中不添加胰岛素。2、3、4、5、6组为实验组,分别在培养基中添加0.005、0.05、0.5、5和10 ug/ml浓度的胰岛素。实验二:观察胰岛素对小鼠早期胚胎体外发育各阶段的影响。实验共分六组:1组为对照组,培养全程均不含胰岛素。其余为实验组,2、3、4、5组分别在1-细胞、2-细胞、4-细胞及桑椹胚阶段移入含0.05ug/ml胰岛素的培养基,24小时后又移到无胰岛素的培养基中;6组为培养全程均含0.05 ug/ml胰岛素。实验三:观察不同时期(2-细胞期、4-细胞期)小鼠胚胎体外培养所需胰岛素的浓度。每个实验均分六组:1组为对照组,培养基中不添加胰岛素。2、3、4、5、6组为实验组,分别在培养基中添加0.005、0.05、0.5、5和10 ug/ml浓度的胰岛素。【结果】实验一:1)、实验组与对照组比较,囊胚率、孵化率及囊胚细胞数显著提高(P＜0.05);2)、五个实验组间比较,囊胚率、孵化率没有差别(P＞0.05);除组2和组3(即胰岛素浓度为0.005 ug/ml、0.05 ug/ml组)与其余实验组比较,囊胚细胞数提高(P＜0.05)外,其余各实验组间囊胚细胞数没有差别(P＞0.05);组2与组3间囊胚细胞数没有差别(P＞0.05)。实验二:1)、2-细胞、4-细胞阶段移入含胰岛素的培养基及培养基中一直含胰岛素组与对照组及其余实验组比较,囊胚率及囊胚细胞数显著提高(P＜0.05);2)、4-细胞阶段移入含胰岛素的培养基与对照组及其余实验组比较,孵化率显著提高(P＜0.05);3)、1-细胞、桑椹胚阶段移入含胰岛素的培养基与对照组及其余实验组比较,囊胚率、孵化率及囊胚细胞数没有差别(P＞0.05)。实验三:共分两部分:第一部分(2-细胞期添加胰岛素):1)、各浓度实验组与未加胰岛素对照组比较,囊胚率、孵化率及囊胚细胞数显著提高(p＜0.05);2)、五个实验组间比较,囊胚率、孵化率没有差别(P＞0.05);除组2和组3与其余实验组比较,囊胚细胞数显著提高(P＜0.05)外,其余各实验组间囊胚细胞数没有差别(P＞0.05);组2与组3比较,囊胚细胞数没有差别(P＞0.05)。第二部分(4-细胞期添加胰岛素):1)、各浓度实验组与未加胰岛素对照组比较,囊胚率、孵化率及囊胚细胞数显著提高(p＜0.05);2)、五个实验组间比较,囊胚率、孵化率没有差别(P＞0.05);除组3与其余实验组比较,囊胚细胞数显著提高(P＜0.05)外,其余各实验组间囊胚细胞数比较没有差别(P＞0.05)。【结论】1、体外培养时,在培养基中添加胰岛素对ICR小鼠早期胚胎发育有促进作用。2、2-细胞及4-细胞阶段添加胰岛素,对早期胚胎发育有促进作用。3、胚胎发育的不同阶段对胰岛素的需求有所不同,0.05 ug/ml为2-细胞、4-细胞阶段体外培养时的最佳浓度。4、胰岛素浓度在0.005～10 ug/ml范围内,对体外培养的小鼠胚胎无毒性作用。