基于共聚焦原理的激光诱导荧光检测器

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微流控芯片使得样品的分离、反应等过程的集成化成为可能,实现了生化试样分析过程的快速、高通量、低消耗。在微流控芯片中嵌入纳米结构,使微流控芯片的分析能力得到进一步的提高。试样的分析过程就是对试样的某项或某几项参数进行检测,因此检测器成为微流控芯片应用中必不可少的部分。根据检测原理,用于微流控芯片检测的检测器包括光学检测器、电化学检测器、质谱检测器及其它检测器。其中光学检测器和电化学检测器应用最广泛,激光诱导荧光、化学发光和紫外吸收光等光学检测器目前仍是主流的检测手段。激光诱导荧光检测是目前光学检测方法中最灵敏的检测方法之一。检测样品自身或其标记物受到激发能够发射荧光是进行激光诱导荧光检测的必备条件,目前在微流控芯片应用领域的主要研究对象都基本满足这一要求,因此在各种用于微流控芯片的检测器中,激光诱导荧光检测器受到极高的重视。本文根据激光诱导荧光检测原理,利用共聚焦技术,搭建了一台用于微纳流控芯片检测的共聚焦激光诱导荧光检测器。建立由二分色镜、滤波片、透镜、光电倍增管、针孔等元件构成的系统结构,解决了检测器装配过程中针孔位置和检测光路调整等难题,使样品与光电倍增管处于光路共扼位置,有效去除非焦平面杂散光,降低光学背景噪音。分别制作微米通道与纳米通道,并完成了微通道芯片与纳通道芯片的对准装配和高温键合。并利用NMM-1检测纳米通道的形状、宽度和深度,计算在同一芯片上的不同位置纳米通道深度及宽度的一致性。以自制的玻璃微纳流控芯片为实验对象,选择FITC溶液作为荧光试剂进行共聚焦激光诱导荧光检测器的应用测试,测定了lOμmol/L至200nmol/L浓度范围内一系列FITC溶液的荧光信号,得到FITC溶液浓度与其荧光信号强度之间的关系。
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