现有的研究资料显示众多化合物或细胞因子均可以诱导ES细胞向心肌细胞分化，而即使是同一种化合物，各种报道的心肌细胞分化效率亦不同，究竟这些诱导化合物哪一种更具有发展前景，选取其中最常见的三种化合物进行研究、对比。建立最适合本实验室研究的方法，为后续试验做准备。根据EST，预测三种常见糖尿病药物的胚胎毒性。因此本实验分为两个部分。　　1.小鼠ES细胞分化心肌细胞方法的建立　　本研究采用经典的三步法分化培养小鼠ES细胞，评价5-氮胞苷、维甲酸、抗坏血酸　　体外诱导小鼠ES细胞分化为心肌细胞。　　实验结果显示，在分化的第5 d加入含有诱导剂的分化培养液对小鼠ES细胞向心肌细胞分化效果最好。　　免疫荧光染色试验结果显示在空白对照组和给药诱导处理组得到的小鼠ES细胞来源的心肌细胞中都有心肌特异性的蛋白α-Actinin和Troponin-T的表达。　　PCR结果显示跳动的EB有心肌细胞特异性基因α-MHC和管家基因GAPDH的表达。　　以上均表明，抗坏血酸与5-氮胞苷和RA比较在小鼠ES细胞诱导分化心肌细胞方面，提前了分化时间，提高了分化率，且抗坏血酸易得、无毒副作用、价格低廉等优点。所以综上，本实验室建立了以抗坏血酸为诱导剂的小鼠ES细胞向心肌细胞分化的方法。　　2.三种糖尿病药物胚胎毒性的研究　　本研究以小鼠胚胎干细胞为模型，以经典的胚胎干细胞实验方法为基础，结合实验室自身的实际条件，建立了基于小鼠胚胎干细胞的体外胚胎毒性预测方法，并采用三种经欧洲替代方法验证中心预验证三种糖尿病药物：二甲双胍、格列美脲和罗格列酮的胚胎毒性。　　结果表明，二甲双胍对小鼠ES的毒性大于3T3细胞。格列美脲对3T3细胞大于小鼠ES的毒性。罗格列酮对小鼠ES的毒性大于3T3细胞。　　将IC503T3,IC50 D3, ID50 D3代入到EST预测模型的三个判别方程中，分别计算各个判别式方程的数值。结果表明二甲双胍为弱胚胎毒性物质，格列美脲为弱胚胎毒性物质，罗格列酮为弱胚胎毒性物质。　　以上实验表明：　　1.本文首次对5-氮胞苷、维甲酸和抗坏血酸诱导小鼠ES细胞向心肌细胞分化进行了评价，其中抗坏血酸、5-氮胞苷和维甲酸均能促进小鼠 ES细胞向心肌细胞的分化，进行统计学分析发现，抗坏血酸与5-氮胞苷、维甲酸和空白对照组比较分化作用均有统计学差异。　　2.本文首次利用基于胚胎干细胞试验的胚胎毒性预测方法对二甲双胍、格列美脲和罗格列酮进行了体外胚胎毒性预测，结果显示：二甲双胍为弱胚胎毒性物质，格列美脲为弱胚胎毒性物质，罗格列酮为弱胚胎毒性物质。