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实验目的本课题旨在探索普洱茶联合人参皂苷在抗肿瘤及抗顺铂副作用等功效,及其联合应用的有效性。对普洱茶联合人参皂苷抗肿瘤及抗顺铂副作用的预防效果和治疗效果进行比较。实验方法1、普洱茶联合人参皂苷抗肿瘤及抗顺铂副作用的预防研究：先给予大鼠自由饮食,饮用普洱茶,灌胃人参皂苷两个月。再接种肿瘤,观察各组成瘤率并记录肿瘤体积。成瘤后肿瘤体积达到1 cm3时,腹腔注射顺铂,并采集0、3、7、15、30天的血清,检测ALT、AST、BUN、CR肝肾功能生化指标,其间每三天记录一次肿瘤体积。30天后处死并取肝、肾及肿瘤组织做病理切片,HE染色。另冻存肝、肾组织留测组织抗氧化性SOD、CAT、GSH-PX、MDA和NO等。2、普洱茶联合人参皂苷抗肿瘤及抗顺铂化疗副作用的治疗研究：先接种肿瘤,观察各组成瘤率并记录肿瘤体积。成瘤后肿瘤体积达到1cm3时,腹腔注射顺铂。给予大鼠自由饮食,饮用普洱茶,灌胃人参皂苷,采集0、3、7、15、30天的血清,检测ALT、AST、BUN、CR肝肾功能生化指标,其间每三天记录一次肿瘤体积。30天后截止处死并取肝、肾及肿瘤组织做病理切片HE染色。另冻存肝、肾组织留测组织抗氧化性SOD、CAT、GSH-PX、MDA和NO等。3、普洱茶体外抗肿瘤研究：用0.15mg/ml、0.25mg/ml、0.35mg/ml、0.45mg/ml四个浓度的带茶培养基对人乳腺癌MCF-7进行培养12h、24h、36h、48h,采用MTT和CCK-8方法检测人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制情况。4、普洱茶体外抗炎研究：巨噬细胞RAW264.7进行正常培养,取最佳状态进行点板。0.45mg/ml浓度的带茶培养基共孵育48h。收集上清,采用ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α。每组LPS作为阳性对照。实验结果1、普洱茶联合人参皂苷在抗肿瘤方面预防效果优于治疗效果。预防实验中,对照组肿瘤体积增长快；普洱组、皂苷组和普洱皂苷联用组肿瘤体积增长缓慢,且肿瘤体积显著低于顺铂组,说明普洱、皂苷及其联合用药都具有有效预防抑制肿瘤增长的功效；治疗实验中,普洱组、皂苷组和普洱皂苷联用组肿瘤体积增长快,且显著性大于CDDP组。预防实验中,顺铂给药后15—18天,由于顺铂的肾毒性,使各组死亡率增加；而治疗实验中,顺铂给药后5—10天,各实验组死亡率增加。说明普洱茶、人参皂苷可有效地预防顺铂引起的毒性,从而延长生存期。肿瘤病理形态学观察：预防实验对照组肿瘤组织高倍镜下核分裂相多见,血管丰富,有部分坏死。顺铂组、人参皂苷组、普洱茶组和普洱联合人参皂苷组,肿瘤组织低倍镜下均见大面积粉红色胞浆染色,肿瘤坏死；治疗实验中各实验组肿瘤组织核分裂相多见,血管丰富。2、普洱茶联合人参皂苷在抗顺铂副作用方面预防效果优于治疗效果。预防实验中,皂苷组和普洱皂苷联用组均可有效抑制CDDP引起的BUN升高且与CDDP组有显著性差异。普洱茶也有效但并不显著。对于CDDP引起的CR值升高,普洱组、皂苷组和普洱皂苷联用组均表现出较强的抑制作用,且三组间无显著性差异。治疗实验中,普洱组、皂苷组、普洱皂苷联用组和CDDP组BUN和CR值均显著性高于对照组,且各组间无显著性差异。说明,普洱茶、人参皂苷及其联合应用可用于预防顺铂化疗导引起的肾损伤,但作为治疗药物没有效果病理形态学观察：(1)预防实验肾组织切片：顺铂组肾小球和肾小管结构破坏,有炎细胞浸润,肾小管水肿。人参皂苷组、普洱茶组、普洱联合人参皂苷组,肾小球和肾小管结构较完整,没有炎细胞浸润；治疗实验顺铂组肾小管和肾小球损伤程度强于预防实验。其他各处理组损伤修复情况明显差于预防实验组。(2)预防实验肝组织病理形态学观察：顺铂组肝组织有炎细胞浸润。人参皂苷组、普洱茶组、普洱联合人参皂苷组与对照组情况无差异,肝细胞结构清晰,肝细胞向四周呈放射状排列,无炎细胞浸润；治疗实验各处理组对肝损伤修复情况略低于预防实验组。3、普洱茶对人乳腺癌MCF-7的增殖抑制作用成时间和浓度剂量依赖性。随着共孵育时间的延长,普洱茶浓度的增高,对MCF-7细胞增殖抑制作用加强。4、预防肾组织抗氧化能力：1.顺铂显著降低肾组织SOD、CAT、GSH-PX等抗氧化酶的活力,显著性增加组织MDA和NO的积累。2.普洱茶可能主要通过显著性增强CAT活力降低组织中MDA和NO的积累且效果优于人参皂苷,从而达到增强组织抗氧化性,有效预防顺铂引起的组织氧化损伤。3.人参皂苷对顺铂引起的组织氧化损伤有一定的预防效果。可通过增强SOD和GSH-PX活力,但对CAT活力没有提高的作用；显著降低组织MDA的积累,其效果劣于普洱人参联合用药,但优于普洱茶的作用；可显著性降低组织NO的积累,效果优于普洱茶但与联合用药效果无差异。4.普洱皂苷联合用药,表现出较强的增强组织抗氧化能力。可显著性增强组织CAT、SOD和GSH-PX活力,并显著降低MDA和NO的积累。5.预防肝组织抗氧化能力：1.顺铂可降低组织的抗氧化能力,从而引起组织脂质过氧化损伤。主要通过显著性降低组织SOD、CAT、GSH-PX活力,对组织MDA和NO的积累无显著性。2.普洱茶对顺铂的氧化损伤有一定的预防作用。主要通过显著增加CAT活力,从而提高组织的总抗氧化能力。3.人参皂苷通过显著提高SOD和CAT抗氧化酶活力,并减少NO的积累,表现了有效地预防组织过氧化的效果。4.普洱茶和人参皂苷联合用药对于组织过氧化的保护作用总体强于普洱茶和人参皂苷单独用药。其显著性增强SOD、CAT活力,显著性降低NO的积累。6.普洱茶能显著增加肿瘤坏死因子TNF-α释放、抑制促炎因子IL-1β、IL-6。实验结论1、普洱茶、人参皂苷及其联合应用有辅助抗肿瘤作用,且可有效预防顺铂副作用。2、普洱茶抗肿瘤和抗顺铂副作用,用于预防效果要好于治疗。3、普洱茶、人参皂苷和联合应用可能通过提高组织抗氧化能力,降低炎症反应的发生,并通过抗肿瘤机制,从而达到辅助抗肿瘤及抗顺铂副作用效果。