前言：　　 脑缺血即脑的短暂性血液供应不足，是一种急性的神经损伤，是人类三大死亡原因之一。血管性痴呆(vascular dementia, VD)是由各种脑血管疾病导致的获得性、持续性认知障碍综合征。目前认为，大脑反复缺血再灌注是造成VD的主要原因之一。脑缺血可造成海马CA1区迟发性神经元坏死，从而导致学习记忆及空间定向等一系列行为障碍。沙鼠双侧颈动脉闭塞全脑脑缺血模型与人类的颈动脉闭塞很相似，是研究人类脑缺血的理想动物模型。　　 盐酸多奈哌齐是第二代治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease， AD)的胆碱酯酶抑制剂，具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制作用，能够增加动物大脑乙酰胆碱含量，具有改善学习记忆障碍、选择性强、作用时间长、无肝脏毒性等特点，其抑制作用是可逆的、非竞争性的，通过抑制AchE，能够使直接参与神经传递的突触间隙的Ach含量增加，是应用于AD的轻、中度对症治疗药。越来越多的证据表明，血管性痴呆患者有着与AD患者类似的胆碱能物质缺乏，因而胆碱能药物（胆碱前体和胆碱酯酶抑制剂）也逐渐用于VD临床治疗，以改善血管性痴呆患者的认知功能。　　 本研究通过Morris水迷宫实验比较各组沙鼠的学习记忆能力，以及比较Ca2＋-CaMK-CREB信号转导通路中p-CaMKⅡ和p-CREB磷酸化蛋白水平的变化和海马CA1区锥体细胞数的变化，为阐明盐酸多奈哌齐对沙鼠脑缺血保护机制提供理论依据。　　 材料与方法：　　 1、动物、试剂与仪器　　 雄性沙鼠，Bradford法测定蛋白浓度试剂盒（普利莱基因技术有限公司），彩色预染蛋白质分子量标准（碧云天生物技术公司），DYY-5型稳流稳压电泳仪电泳仪（北京六一仪器），Hoefer miniVE垂直电泳，低温高速离心机（Centrifuge5810R,德国Eppendorf），苏木素染液和伊红染液（南京建成生物工程研究所），LeicaCM1900冰冻切片机，OLYMPUS BX51等。　　 2、沙鼠脑缺血模型制备及给药　　 36只雄沙鼠随机分为假手术组、缺血组、缺血治疗组，每组各12只，乙醚麻醉，颈部正中切口，分离两侧颈总动脉，无创伤微血管夹夹闭双侧颈总动脉，阻断血流10min后再灌注，消毒，缝合创口，放回原条件下饲养。假手术组除不夹闭颈总动脉外，其余操作同上。缺血治疗组从手术后当天连续灌胃给药(5mg/kg/d)三周，假手术组、缺血组从手术后当天连续灌胃给相同体积的生理盐水三周。　　 3、神经学评价　　 手术24h后观察各组沙鼠的神经症状，按五个等级评分：0，无症状；1，背部弓起；2，强直性癫痫发作；3，上睑下垂；4，无意识。评价后分值越高，神经损伤越严重。　　 4、Morris水迷宫实验测试各组沙鼠的学习记忆能力　　 Morris水迷宫行为学测试各组沙鼠的学习记忆能力，训练四天后，记录其每天的平均逃避潜伏期（四天）和最后一天的90s内的穿台次数。　　 5、HE染色观察各组沙鼠的海马CA1区　　 HE染色观察各组沙鼠的脑内海马CA1区病理变化。　　 6、Western blotting方法检测p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白表达　　 提取各组沙鼠脑海马组织中p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白，考马斯亮蓝法蛋白定量，经10％SDS-PAGE凝胶电泳后将蛋白转印至PVDF膜上，一、二抗孵育，ECL化学发光法显色。　　 7、统计学分析　　 结合图像采集分析系统，所得数据用均数±标准差表示，应用SPSS11.0统计软件，除水迷宫的潜伏期数据用重复测量数据的方差分析，其他数据用单因素方差分析进行组间比较，P＜0.05为有统计学意义，P＜0.01为有显著统计学意义。　　 实验结果：　　 1、神经学评价结果显示缺血组和缺血治疗组的分值明显高于假手术组（P＜0.01），而缺血组与缺血治疗组无差异（P＞0.05）。　　 2、Morris水迷宫结果显示缺血组每天的平均潜伏期较假手术组的延长(P＜0.01)，而缺血组与缺血治疗组之间比较无差异（P＞0.05）。最后一天的穿台实验结果显示缺血组穿台次数明显少于假手术组(P＜0.05)，缺血治疗组的穿台次数明显多于缺血组，而缺血治疗组与假手术组无差异（P＞0.05）。　　 3、HE染色结果显示假手术组海马CA1区锥体细胞排列整齐紧密，缺血组失去正常结构，锥体细胞层次极其紊乱有空泡样变，锥体细胞减少，缺血治疗组锥体细胞排列较紧密，未见空泡样变，锥体细胞较缺血组有所增加（P＜0.05）。　　 4、Western blotting结果显示缺血组沙鼠脑海马组织中p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白的表达较假手术组和治疗组减少（P＜0.05），而假手术组与缺血治疗组比较无差异（P＞0.05）。　　 结论：　　 1、沙鼠脑缺血再灌注24h后能引起神经损伤，而盐酸多奈哌齐不能快速改善神经损伤。　　 2、沙鼠脑缺血组海马组织中的p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白水平的表达较假手术组减少。　　 3、缺血治疗组海马组织中的p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白水平的表达较缺血组增加。　　 4、盐酸多奈哌齐改善沙鼠脑缺血再灌注引起的学习记忆障碍，其机制可能是通过增加海马组织中的p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白水平的表达，从而启动多种保护基因的表达（C-fos，BDNF，Bcl-2等），使海马CA1区神经元得到保护，进而改善学习记忆障碍。