论文部分内容阅读
目的:胃癌在中国的发病率是仅次于肺癌的恶性肿瘤。目前胃癌治疗的各种手段均存在着一定的局限性,治疗后仍然面临术后复发转移,放化疗后免疫力低下以及肿瘤耐药等问题。中医药在抗肿瘤方面表现出独特的优势,在一定程度上可以减轻中晚期患者肿瘤疼痛、提高放化疗后免疫功能以及增强化疗药物抗肿瘤特性等。本实验以胃癌细胞株SGC-7901为实验对象,从细胞水平出发,探究内蒙古沙棘果渣总黄酮对胃癌细胞增殖、迁移的影响以及可能的作用机制。方法:本研究采取乙醇萃取的方法从沙棘果渣中提取总黄酮,并进行含量测定。应用cck8法检测不同浓度（1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml）的沙棘总黄酮对胃癌细胞增殖能力的影响,并计算其半抑制浓度(IC50)值。参考得到的IC50值,采用细胞划痕、Transwell小室、流式细胞术和实时荧光定量PCR（qPCR）检测SGC-7901胃癌细胞迁移能力、细胞周期各时相以及药物作用前后肿瘤细胞Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达情况。结果:（1）通过正交优化实验,获取最佳提取条件:乙醇体积分数为60%,提取时间为2h,料液比为1:20,提取2次。该法沙棘总黄酮得率较高,含量可达32.22mg/g。（2）细胞行为学实验结果显示:不同浓度沙棘总黄酮能不同程度地抑制人胃癌细胞SGC7901的增殖,并且呈剂量和时间依赖性;药物作用细胞24h、48h、72h后的IC50值分别为4.578mg/ml、3.676mg/ml、3.795mg/ml;划痕实验显示,与对照组比较,细胞划痕愈合受到不同程度抑制;沙棘总黄酮作用48h后,迁移实验显示,与对照组相比具有显著差异,且呈剂量依赖性;流式细胞术的PI单染法结果显示沙棘总黄酮将细胞周期阻滞在S期检查点。（3）沙棘总黄酮处理SGC-7901细胞48h后,实时荧光定量PCR结果显示,实验组细胞上皮钙粘蛋白（E-cadherin）、糖原合成酶激酶-3（Glycogen Synthase Kinase-3β,gsk3β）表达减少,分泌型卷曲相关蛋白（secreted frizzled—related protein,SFRP）表达增加;各目的基因的2-ΔΔCT值分别为:E-cadherin:0.34±0.07;Gsk-3β:0.35±0.05;SFRP:2.39±0.19,即在沙棘总黄酮为4mg/ml时,SFRP的含量是对照组的（2.39±0.19）倍。结论:（1）综合单因素和正交实验结果,确定了沙棘果渣总黄酮最佳提取条件参数:乙醇体积分数为60%,提取时间为2 h,料液比为1:20,提取次数为2次;在此条件参数下,沙棘果渣总黄酮提取含量可达32.22 mg/g。（2）细胞划痕实验以及Tanswell小室实验验证了沙棘果渣总黄酮可以减弱SGC-7901细胞的迁移能力;此外,沙棘果渣总黄酮可通过阻滞SGC-7901细胞周期检查点S期抑制胃癌细胞增殖。（3）沙棘总黄酮可以上调SFRP基因在SGC-7901细胞中的表达以及下调E-cadherin、gsk-3β的表达。（4）沙棘总黄酮对SGC-7901细胞影响的分子机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关分子SFRP的高表达以及gsk3β、E-cadherin的低表达有关。