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背景与目的:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是临床上较为常见的一种危重症,其病死率较高。导致AKI的因素有很多,主要包括肾缺血/再灌注损伤、肾毒性药物、脓毒症等,既往研究多集中于缺血/再灌注损伤AKI,而对于脓毒症如何引起AKI发生、发展的机制研究相对匮乏。多项调查资料显示,严重脓毒症和内毒素休克才是导致AKI最为常见的病因,而除肾替代治疗外,目前临床上尚无明确的治疗方案或措施能够预防内毒素休克性AKI的发生或有效缩短其自然病程。近年来氧化应激学说成为内毒素休克致使器官损伤发病机制新的研究方向,Nrf2作为氧化应激中释放的主要转录因子,参与多种抗氧化基因的调控,在器官损伤中发挥其保护作用。本课题组在前期研究中发现,在内毒素休克性肺损伤模型中存在着Nrf2的异常表达,借鉴前期研究的经验,本研究拟通过建立兔内毒素休克性肾损伤模型,初步探讨PKC-Nrf2/HO-1信号通路在内毒素休克性AKI中的作用及其可能机制。方法:选取40只同月龄健康的雄性新西兰大白兔,利用随机数字表法将其随机分为四组,每组10只,分别命名为CON组、AKI组、CHA组和PMA组。CHA组经兔耳缘静脉注射PKC阻滞剂-白屈菜赤碱5mg/kg,PMA组静脉注射PKC激动剂-佛波酯5μg/kg,CON组与AKI组注射各自溶媒1%DMSO 0.5ml。30min后,AKI组、PMA组及CHA组静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg(溶于2mL生理盐水),CON组给予等容量生理盐水。静脉注射LPS或生理盐水6h时后,先采集动脉血,生化检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)浓度;然后放血处死兔,留取双肾组织,左肾浸入4%多聚甲醛液中固定,右肾置于液氮罐中速冻后于-80℃保存。将固定后的左肾应用HE染色,由经验丰富的病理医师通过光学显微镜观察肾脏病理学变化,并评定肾损伤评分;将冻存后的右肾碾碎后,一部分应用RT-PCR技术检测肾组织中Nrf2及HO-1的RNA水平,一部分应用蛋白印迹的方法检测肾组织中PKCα蛋白、Nrf2蛋白及HO-1蛋白的表达。结果:1.在组织病理学水平,与CON组比较,AKI组、CHA组及PMA组的肾脏损伤评分升高均有统计学意义(P<0.05);而与AKI组比较,CHA组肾损伤评分升高、PMA组肾损伤评分降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.在血清学水平,与CON组比较,AKI组、CHA组及PMA组的血清BUN、Cr浓度升高均有统计学意义(P<0.05);而与AKI组比较,CHA组血清BUN、Cr浓度升高,PMA组血清BUN、Cr浓度降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.在核酸水平,与CON组比较,AKI组、CHA组及PMA组中的Nrf2 mRNA及HO-1 mRNA表达均出现不同程度的上调(P<0.05)。而与AKI组比较,CHA组的Nrf2 mRNA及HO-1 mRNA表达均出现下降(P<0.05),PMA组的Nrf2 mRNA及HO-1 mRNA表达均出现上调(P<0.05)。4.在蛋白表达水平,与CON组比较,AKI组、CHA组及PMA组中PKCα蛋白、Nrf2蛋白及HO-1蛋白表达均出现升高(P<0.05);而与AKI组相比,CHA组随着PKCα蛋白的下降,Nrf2蛋白与HO-1蛋白的下调均无统计学意义(P>0.05);PMA组随着PKCα蛋白的升高,Nrf2蛋白、HO-1蛋白的表达均出现上调有统计学意义(P<0.05)。结论:Nrf2/HO-1通路的激活是机体在内毒素休克性AKI时适应性调节的一种机制,其发挥作用受PKC的调控。