灭菌的淡紫拟青霉代谢产物对番茄生长与根结线虫病害的影响

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设施内栽培番茄时较易引发根结线虫病害,造成的危害不仅严重而且很难防治,轻则降低番茄产量,重可造成番茄绝收。化学防治存在诸多弊端,而生物防治通常使用生物制剂或其它绿色防控措施代替化学药剂,其针对性强且防治效果好,得到了越来越多研究学者的关注。其中生防制剂淡紫拟青霉,在防治根结线虫病害方面效果显著,同时还可以促进植株生长。然而,淡紫拟青霉活菌在使用时会遇到许多问题,如:防效不稳定、高温环境下容易失活同时会损害人体健康。有关资料显示,淡紫拟青霉代谢产物可以实现批量生产、没有孢子飘散、施用也比较方便,杀线促生效果较好,研发空间较大。但前人在处理代谢产物时多采取过滤的方式过滤掉孢子,存在生产效率较低和费用较高的问题,很难实现规模化、商品化生产,针对代谢产物灭菌方式的筛选研究较少;针对灭菌的淡紫拟青霉代谢产物田间具体的实践应用,系统性的研究也较少;灭菌的淡紫拟青霉代谢产物有效成分的分析测定也有待进一步明确。因此,本研究采用不同方式对淡紫拟青霉代谢产物进行灭菌处理,通过平板试验、根结线虫虫卵孵化和二龄幼虫抑杀试验,筛选出了杀线效果及灭菌效果均较好的方式,并采用此方式大量制备灭菌的淡紫拟青霉代谢产物;通过盆栽试验,明确了灭菌的淡紫拟青霉代谢产物有效防治番茄根结线虫病害并促进番茄植株生长的最佳施用浓度;采用GC-MS技术分析了灭菌的淡紫拟青霉代谢产物的总成分和有效成分,测定了有效成分2,4-二叔丁基苯酚的含量并进行了验证试验。主要研究结果如下:(1)采用0.22μm过滤、100℃高温处理10 min和40 k Hz超声波处理30 min 3种方式对淡紫拟青霉代谢产物进行灭菌处理。平板试验发现灭菌效果依次是100℃高温处理10 min>0.22μm过滤>40 k Hz超声波处理30 min。不同方式灭菌的淡紫拟青霉代谢产物对根结线虫虫卵和二龄幼虫进行处理,可以得出降低虫卵孵化率和抑杀线虫效果最佳的方式是100℃高温处理10 min,0.22μm过滤和40 k Hz超声波处理30 min之间没有显著性差异。(2)采用3种不同浓度(灭菌的淡紫拟青霉代谢产物与清水1:1混合、1:5混合和1:10混合)的灭菌的淡紫拟青霉代谢产物对盆栽番茄进行处理,以阿维菌素和清水作对照,定期进行取样测定生长指标、生理指标、番茄果实产量、番茄果实品质和根结线虫病害指标。综合比较后发现灭菌的淡紫拟青霉代谢产物与清水1:1混合和其它处理相比可有效防治线虫病害且促进番茄生长效果最佳。(3)采用GC-MS对灭菌的淡紫拟青霉代谢产物的成分进行分析:共检测出总计75个物质,其中经查阅文献资料可以明确名称的物质有12类36种物质,包括醇类3种(7.19%);酯类6种(61.91%);烷烃类12种(3.03%);烯烃类3种(0.12%);胺类1种(0.97%);酮类1种(0.04%);芳香烃类2种(0.29%);苯酚类1种(0.64%);氨基酸类1种(0.03%);炔烃类1种(0.04%);杂环类4种(2.54%);酸类1种(0.13%)。其中可能具有杀线或促生作用的物质有4种,包括丁二酸酐、哌嗪、2,4-二叔丁基苯酚、邻苯二甲酸二丁酯,采用气相色谱内标法对兼具杀线作用和促生作用同时含量相对较高的2,4-二叔丁基苯酚进行定量分析,经测定代谢产物中2,4-二叔丁基苯酚的含量为1.39%。1.39%的2,4-二叔丁基苯酚溶液对二龄幼虫进行生物学验证,结果显示1.39%的2,4-二叔丁基苯酚溶液对二龄幼虫的具有显著的抑杀作用。综上所述,灭菌效果及抑杀线虫效果均较好的方式是100℃高温处理10 min,灭菌的淡紫拟青霉代谢产物与清水1:1混合和其它处理相比可有效促进番茄生长且线虫病害防治效果最佳,灭菌的淡紫拟青霉代谢产物中含有杀线或促生作用类的成分,其中2,4-二叔丁基苯酚的含量为1.39%,1.39%的2,4-二叔丁基苯酚溶液对二龄幼虫的具有显著的抑杀作用。
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