阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)是一种以慢性间歇性缺氧为主要特征的睡眠呼吸性疾病,临床上常表现为打鼾且鼾声不规律、反复憋醒、夜尿增多、日间嗜睡、全身疲劳、记忆力下降等一系列症候群。骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种以骨量减低,骨组织微结构损坏,导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的全身性骨病。研究发现,OSAHS患者由于夜间反复出现呼吸暂停和低通气,导致机体缺氧、CO2储留、全身炎症反应、氧化应激等一系列病理生理改变,造成心脑血管、神经、内分泌等全身多系统损伤,甚至和肺癌等恶性肿瘤的发生密切相关,严重影响患者的生命质量。近年有学者指出OSAHS患者有发生骨质疏松的风险,但具体的作用机制尚不明确。本研究拟从性激素、OPG/RANKL系统及长链非编码RNA LINC-PINT三个方面进一步探讨OSAHS对骨代谢的影响及可能机制。第一部分男性OSAHS患者性激素水平与骨密度的相关性研究目的通过测定不同程度男性OSAHS患者血清性激素水平及骨密度(BMD)的变化并做相关性分析,了解OSAHS对骨代谢的影响及性激素可能发挥的作用。方法根据呼吸暂停低通气指数(apnea hypopnea index,AHI)将我院确诊的88名男性OSAHS患者分为3组:轻度组(5次/h≤AHI<15次/h)30例、中度组(15次/h≤AHI<30次/h)30例、重度组(AHI≥30次/h)28例,并选择30名非OSAHS男性人群作为对照组。记录所有受试者一般资料,测定骨代谢指标钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、血清总Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(TPINP)和其特异序列β-骨胶原交联(β-CTX)浓度,应用双能X线骨密度仪测定腰椎、股骨颈骨密度,采用化学发光免疫分析法检测各组受试者的血清雌二醇、孕酮、睾酮、促卵泡生成素、促黄体生成素、泌乳素的水平,比较各组之间的差异并进行Pearson相关性分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、重度OSAHS组ALP、TPINP均较对照组减少(P<0.05);中、重度OSAHS组β-CTX较对照组及重度OSAHS组β-CTX较轻度OSAHS组均增加(P<0.05)。2、中度OSAHS组腰椎、股骨颈骨密度较对照组降低(P<0.05);重度OSAHS组腰椎、股骨颈骨密度较对照组、轻度OSAHS组降低(P<0.05)。3、中、重度OSAHS组血清睾酮水平较对照组降低(P<0.05)。4、Pearson相关性分析显示:OSAHS患者睾酮与AHI呈负相关(r=-0.413,P=0.001);腰椎及股骨颈骨密度与AHI呈负相关(分别为r=-0.319,P=0.027、r=-0.307,P=0.035);睾酮与腰椎、股骨颈骨密度呈正相关(r=0.375、P<0.01,r=0.396、P<0.01)。结论男性OSAHS患者有发生骨质疏松的风险,且与缺氧程度密切相关,睾酮水平下降可能是OSAHS引起骨质疏松的机制之一。第二部分基于OPG/RANKL系统研究OSAHS对骨代谢的影响第一章男性OSAHS患者血清OPG、RANKL的变化目的了解不同程度男性OSAHS患者血清OPG、RANKL的变化情况。方法根据呼吸暂停低通气指数(AHI)将我院确诊的88名男性OSAHS患者分为3组:轻度组(5次/h≤AHI<15次/h)30例、中度组(15次/h≤AHI<30次/h)30例、重度组(AHI≥30次/h)28例,并选择30名非OSAHS男性人群作为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组受试者的血清OPG、RANKL水平,并与AHI进行Pearson相关性分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、重度OSAHS组血清OPG较对照组、轻度OSAHS组降低(P<0.05);中度OSAHS患者血清RNAKL水平较对照组升高(P<0.05),重度OSAHS组血清RNAKL水平较对照组、轻度OSAHS组升高(P<0.05);各组OPG/RANKL比值均较对照组降低(P<0.05)。2、Pearson相关性分析显示:血清OPG与AHI呈负相关(r=-0.296,P=0.048),血清RANKL与AHI呈正相关(r=0.327,P=0.012),OPG/RANKL与AHI呈负相关(r=-0.531,P<0.01)。结论OSAHS患者血清OPG水平降低、RANKL水平升高,且与缺氧程度密切相关。OPG/RANKL比值下调可能是OSAHS引起骨质疏松的机制之一。第二章慢性间歇性缺氧对大鼠骨代谢及OPG、RANKL表达的影响目的通过建立wistar大鼠慢性间歇性缺氧(CIH)模型探讨CIH对骨代谢及骨组织OPG、RANKL表达的影响。方法选取20只成年健康雄性wistar大鼠随机分为正常对照组及CIH组,每组10只。对照组置于空气循环舱内,CIH组于置于间歇性缺氧舱内,每日8小时,共8周。应用双能X线骨密度仪测定大鼠全身、股骨、腰椎骨密度(BMD),取单侧股骨组织行HE染色,采用ELISA法检测大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、I型胶原N端前肽(PINP)、I型胶原羧基端肽β降解产物(β-CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和氧化应激产物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),应用Real-time PCR技术测定股骨组织OPG、RANKL mRNA相对表达量,应用Western Blot测定股骨组织OPG、RANKL蛋白相对表达水平。比较两组各指标的差别,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、与对照组比较,CIH组股骨HE染色可见骨小梁稀疏,骨小梁间隙明显增大,部分骨小梁断裂,周围可见少量纤维组织增生,骨髓组织有炎性细胞浸润。2、与对照组比较,CIH组血清BGP降低(P<0.05),而血清β-CTX、TRAP升高(P<0.05)。3、与对照组比较,CIH组全身及股骨BMD降低(P<0.05)。4、与对照组比较,CIH组血清TNF-α、IL-6、MDA升高(P<0.05),SOD降低(P<0.05)。5、与对照组比较,CIH组股骨组织OPG mRNA相对表达量降低、RANKLmRNA相对表达量升高、OPG/RANKL比值降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。6、与对照组比较,CIH组股骨组织OPG蛋白表达水平降低、RANKL蛋白水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论雄性wistar大鼠在慢性间歇性缺氧环境下出现炎症反应、氧化应激,可能通过OPG/RANKL系统影响骨代谢,降低骨密度,增加骨质疏松发生的风险。第三部分LINC-PINT在CIH环境下大鼠骨组织中的表达目的通过建立wistar大鼠慢性间歇性缺氧(CIH)模型探讨CIH对骨组织中LINC-PINT表达的影响。方法选取20只成年健康雄性wistar大鼠随机分为正常对照组及CIH组,每组10只。对照组置于空气循环舱内,CIH组于置于间歇性缺氧舱内,每日8小时,共8周。应用Real-time PCR技术测定股骨组织LINC-PINT mRNA相对表达量,比较两组差别,并与骨密度做相关性分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、与对照组比较,CIH组股骨组织LINC-PINT mRNA相对表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、Pearson相关性分析显示:CIH组大鼠股骨组织LINC-PINT与全身骨密度呈负相关(r=-0.287,P=0.043).结论慢性间歇性缺氧环境下雄性wistar大鼠骨组织LINC-PINT表达上调,可能与骨代谢密切相关。