基于光子晶体微球富集、净化与检测真菌毒素AFB1的研究

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黄曲霉毒素是一种具有极强毒性、致癌性的真菌毒素,常存在于谷物产品中。本文建立一种基于反蛋白石光子晶体微球和磁性蛋白石光子晶体微球富集净化和检测AFB!的方法。首先利用微流控平台结合了 Stober法制备出反蛋白石光子晶体微球和磁性蛋白石光子晶体两种结构不同的微球,有着比较规则的结构和明显的反射峰。对微球表面分别修饰上醛基、羧基、环氧基。基于反蛋白石光子晶体微球和磁性蛋白石光子晶体微球免疫亲和-高效液相色谱(HPLC)法富集净化AFB1,对几个条件进行优化,得出醛基作为连接抗体的最佳基团,洗脱剂浓度为100%的甲醇溶液洗脱效率最好,优化洗脱剂体积为800μL,0.03mL的填充微球量能富集AFB1最多达50ng,反蛋白石光子晶体微球作为载体洗脱效率能达到90%,在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为70.00±7.07~85.15±7.58%,75.00±6.59~88.21±2.31%, 88.21±3.07~109.4±5.73%,磁性蛋白石光子晶体微球作为载体洗脱回收率达到80-85%,在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为65.84±3.50~71.15±7.74%,58.66±1.06~81.66±0.70%,72.95+5.13~87.28±10.13%。从洗脱效率以及加标回收率来看,反蛋白石光子晶体微球作为载体能够得到更好的效果。基于反蛋白石光子晶体微球和磁性蛋白石光子晶体微球荧光信号适配体传感器检测AFB1的方法,通过优化选择羧基作为结合适配体最佳基团。基于反蛋白石光子晶体微球荧光信号适配体传感器,根据优化条件能确定的AFB1标准曲线线性范围在0.01-100ng/mL,检测限为0.01ng/mL。在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为 94.04±10.30~112.4±9.35%,78.17± 10.69~88.69±6.94%,88.71±7.23~101.38±8.67%。基于磁性蛋白石光子晶体微球荧光信号适配体传感器,根据优化条件能确定的AFB1标准曲线线性范围在0.01-10ng/mL,检测限为0.01ng/mL。在大米、小麦、玉米加标实验中的回收率分别为 64.09±7.88~75.72±4.70%,62.62±4.79~72.50±6.51% ,69.60±4.15~81.67±3.56%。与ELISA方法相比,在农产品加标回收率的测定有着一致性,证明该方法建立的可行性。对反蛋白石光子晶体微球和磁性蛋白石光子晶体微球作为适配子传感器进行对比,能得到反蛋白石光子晶体微球作为载体达到的效果更好。
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