α-苦瓜素在毕赤酵母中表达及生物活性分析

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:ccwjg
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本研究采用RT-PCR技术从新鲜苦瓜叶片中获取成熟肽基因编码区cDNA(命名为α-MMCC);将扩增得到的基因片段插入克隆载体pGEM-TEasyVector中,酶切鉴定正确后进行序列测定,结果证明得到的α-MMCC与预计的核苷酸序列完全一致;构建了携带有α-MMCC的毕赤氏酵母分泌型表达质粒pPICZαB/α-MMCC,重组质粒经SacⅠ线性化后转化宿主菌GS115,通过基因组PCR鉴定重组子及其表型。 在此基础上通过正交实验优化甲醇诱导条件,经SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定,筛选高效表达菌株。重组酵母在pH值为6.0的BMGY中增殖培养,甲醇终浓度为1.0﹪的BMMY(pH6.5)中诱导72h,重组蛋白可达总蛋白量的15﹪左右。   
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