目的:　　 R-spondin家族是近年来发现的一类重要的Wnt途径激活因子。R-spindin2(RSPO2)作为R-spondin家族的一员，在胚胎发育，骨骼形成和肌肉分化过程中发挥着重要作用，其突变能引起Dupuytren病。一直以来RSPO2被认为是Wnt途径的激活剂，但它在癌症中的作用仍不清楚。前期工作中，我们课题组发现在肠癌细胞HCT116和DLD1中，RSPO2能够抑制细胞生长和肿瘤形成。本课题就其抑制肿瘤生长的分子机制进行了研究。　　 方法:　　 1)通过克隆形成，MTT和裸鼠成瘤实验研究RSPO2对肠癌细胞增殖的影响。　　 2)通过双报告基因检测RSPO2和LGR5对Wnt途径活性的影响。　　 3)通过Real-time PCR和免疫荧光染色分别检测RSPO2对β-catenin和LGR5mRNA和蛋白水平的影响。　　 4)通过Western blot检测RSPO2对Wnt下游基因的作用。　　 5)通过对LGR5进行RNA干扰和过表达，研究RSPO2对Wnt途径的影响与LGR5的关系。　　 6)通过相关性分析研究RSPO2和LGR5在肠癌中表达是否具有相关性。　　 结果:　　 1) RSPO2通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制肠癌细胞生长。双报告基因检测结果显示RSPO2能够抑制Wnt途径活性;Western blot检测发现高表达RSPO2的LS174T和DLD1细胞，Wnt途径下游基因C-Myc、Cyclin D1和CD44表达明显下调;Real-time PCR和免疫荧光检测发现，经RSPO2蛋白处理，DLD1和LS174T细胞的β-catenin蛋白水平明显下调而mRNA水平未见改变。　　 2) RSPO2对Wnt/β-catenin信号通路的抑制伴随着LGR5上调。Western blot实验发现LS174T和DLD1细胞经RSPO2蛋白处理后LRP6的磷酸化和β-catenin的水平在1h时均发生上调，之后逐渐减弱，6h时低于起始水平;Real-time PCR和免疫荧光检测发现，经RSPO2蛋白处理，DLD1和LS174T细胞LGR5的mRNA和蛋白水平均明显上调。　　 3)RSPO2对Wnt/β-catenin信号通路的抑制依赖LGR5表达。在DLD1细胞中干扰LGR5后RSPO2对Wnt途径的抑制作用消失;LGR5稳定高表达的HEK293细胞与对照组相比，RSPO2蛋白对Wnt途径的促进作用随时间逐渐减弱并最终表现为抑制;双报告基因检测结果显示在HEK293细胞中共转染LGR5和RSPO2质粒，RSPO2对Wnt途径的促进作用随LGR5浓度的升高而逐渐减弱。在DLD1细胞中也出现类似结果。　　 4)肠癌中RSPO2和LGR5的表达呈现负相关。通过Real-time PCR检测发现50对肠癌样本中有36对LGR5表达明显上调，并且LGR5与RSPO2的表达呈负相关。　　 结论:　　 在LGR5高表达的肠癌细胞系中，RSPO2通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖。RSPO2能够瞬时增强Wnt/β-catenin信号通路导致LGR5表达上调，随后引起β-catenin降解从而抑制Wnt途径。我们的研究发现了一个肠癌中RSPO2引起的LGR5依赖的Wnt途径负反馈调节机制。