论文部分内容阅读
目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞放射增敏的效应,探讨其对宫颈癌放射增敏作用的机制,为As2O3作为宫颈癌的放射增敏剂应用于临床提供实验依据。方法:MTT法测定人宫颈癌Hela细胞对As2O3药物的敏感性,计算细胞抑制率=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%,实验重复三遍,取平均值,结果以药物浓度为横坐标、以细胞抑制率为纵坐标,通过Excel软件绘制细胞生长抑制曲线,通过ID50计算软件计算出药物作用48h后的半数致死剂量(ID50)。集落形成法观察20%ID50的As2O3对Hela细胞的放射增敏作用,计数含50个细胞以上的集落数,求出细胞存活分数(细胞存活率),细胞存活率的计算方法为:处理组集落形成率/对照组集落形成率,实验重复三遍,取平均值,结果以放射剂量为横坐标、以细胞存活率为纵坐标,采用“多靶单击模型”通过SPSS13.0软件拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比(SER)。流式细胞仪测定细胞周期,分为空白对照组(空白组)、20%ID50的As2O3组(单药组)、单纯放射组(单放组)、放射+20%ID50的As2O3组(药放组),每个组设3个平行样本,于25 cm2的培养瓶中接种1×105个细胞。收集各组处理后的细胞进行固定、染色,流式细胞仪检测细胞周期的分布,用Multicycle软件进行分析。免疫细胞化学法及western blotting法(按试剂盒说明书操作)检测空白组、单药组、单放组、药放组在药物作用后的p2lwaf1/cip1及Bcl-2两种蛋白表达变化情况。结果:1.As2O3对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用随药物浓度的增加而增强,48h时的半数致死剂量(ID50)值为10.86μmol/L。2.As2O3对人宫颈癌Hela细胞有放射增敏作用,药放组的细胞存活率低于单放组,其平均致死剂量(D0)及准域剂量(D0)均小于单放组(D0:2.49 Gy vs 3.45 Gy,Dq:1.03 Gy vs 1.89 Gy),放射增敏比(SER)为1.39。3.空白组、单药组、单放组、药放组在药物作用48h后G2/M期的细胞比例分别为12.45±1.88、18.91±1.65、18.42±2.29、31.07±6.66,统计分析表明单放及单药均能提高G2/M期的细胞比例(P<0.05,P=0.012,P=0.007),放射及As2O3药物联合则G2/M期的细胞比例提高更显著(P<0.01,P=0.000)。4.免疫细胞化学法及Western blot检测各组p2lwaf1/eip1及Bcl-2两种蛋白表达情况基本一致,结果表明可知放射及药物均能提高p2lwaf1/cip1的表达(P<0.05),放射及As2O3药物联合则p2lwaf1/cip1表达更高(P<0.01);放射及药物均能降低Bcl-2的表达(P<0.05),放射及As2O3药物联合则Bcl-2表达更低(P<0.01)。结论:1.As2O3对人宫颈癌Hela细胞具有放射增敏作用。2.As2O3对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用可能与其抑制Hela细胞的亚致死性损伤的修复、调整细胞周期的分布、上调p2l(waf1/cip1蛋白及下调Bcl-2蛋白的表达有关。